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593318518

新虫 (小有名气)

[求助] 为什么酶切片段大小大于预测 已有5人参与

使用酶切质粒载体得到插入片段。插入片段理论上大小为973bp,酶切完后跑1%琼脂糖凝胶,酶切片段位于1000bp之上。这是为什么了?
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593318518

新虫 (小有名气)

补充一下,酶切产物有纯化,所以排除盐离子影响
4楼2015-05-04 11:37:08
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查看全部 8 个回答

晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-04 23:21:24
排除本身实验问题之后,有一种解释:DNA结构可能发生变化,如发生超螺旋或者环化,电泳时,迁移率会发生变化。
2楼2015-05-04 09:53:42
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593318518

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-04 09:53:42
排除本身实验问题之后,有一种解释:DNA结构可能发生变化,如发生超螺旋或者环化,电泳时,迁移率会发生变化。

有参考文献吗
3楼2015-05-04 11:31:56
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是这样的,970bp左右的片段,胶浓度应为2%最佳,你现在是1%,而且973bp和1000bp也差不多远,所以先换个胶浓度试试
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
5楼2015-05-04 14:16:42
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