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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR跑出来没有CT值，怎么回事
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

[求助] 定量PCR跑出来没有CT值，怎么回事 已有4人参与

跑了两个样做标准曲线，跑完结果第一个样就没有检测到CT值，怎么回事？两个样品就引物不一样，其他都一样啊。刚接触定量PCR，求教
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天道酬勤
1楼 2015-05-03 13:38:08
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
随风飘摇11: 金币+2, ★有帮助 2015-05-03 18:13:24
首先你要确认你的这对引物是否适合在你这个反映程序中扩增，可用凝胶电泳检测引物的特异性、退火温度等等。如果引物合适，再确认这个探针是否在所测样品中有表达，如果本身就没有表达或者表达量极低，也是无法检测的。祝好运。
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2楼2015-05-03 15:53:10
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-03 15:53:10
首先你要确认你的这对引物是否适合在你这个反映程序中扩增，可用凝胶电泳检测引物的特异性、退火温度等等。如果引物合适，再确认这个探针是否在所测样品中有表达，如果本身就没有表达或者表达量极低，也是无法检测的 ...

怎么检测引物是否合适？定量的引物也可能用来做普通的PCR扩增吗？

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天道酬勤
3楼2015-05-03 18:13:10
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晞朔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-05-03 18:13:10
怎么检测引物是否合适？定量的引物也可能用来做普通的PCR扩增吗？
...

可以。用凝胶电泳就可以
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4楼2015-05-03 18:14:53
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-03 18:14:53
可以。用凝胶电泳就可以...

老实说，定量引物做半定量都不行，半定量不就是普通PCR吗？你这样做过吗

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天道酬勤
5楼2015-05-03 18:19:06
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晞朔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-05-03 18:19:06
老实说，定量引物做半定量都不行，半定量不就是普通PCR吗？你这样做过吗
...

片段多大？？
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6楼2015-05-03 18:20:08
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-05-03 18:20:08
片段多大？？...

基因全长1700bp。但不是说定量的引物只有80-400bp设计的吗？引物是我老师设计的

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天道酬勤
7楼2015-05-03 18:32:32
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晞朔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-05-03 18:32:32
基因全长1700bp。但不是说定量的引物只有80-400bp设计的吗？引物是我老师设计的
...

是可以检测的。用琼脂糖凝胶电泳检测下
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8楼2015-05-03 19:36:15
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violin0313

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是定量程序没设定对，完全按照你跑出CT值的那个程序跑
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9楼2015-05-04 11:17:51
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by violin0313 at 2015-05-04 11:17:51
可能是定量程序没设定对，完全按照你跑出CT值的那个程序跑

两个程序一样的，一块儿跑的

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天道酬勤
10楼2015-05-04 12:04:38
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