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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr条带弥散
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yaojie1889

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr条带弥散 已有1人参与

我的目的片断在3200多。用的是primer star的体系。
预变性98 5min
变性98 10s \
退火60 5s + 30个循环
延伸72 3m30s /
72 10min
之前用这个体系 菌液PCR 都P的出来。现在用菌液和之前的PCR回收产物都P成这样弥散状态的。电泳液也都用新的 。引物是用ddH2O保存的。
下图可以看出跑的时间越长越弥散。
pcr条带弥散
YJ20150427.jpg
下面这幅图是第一次出现 弥散的用的体系都一样。
pcr条带弥散-1
yj 2015.4.25.jpg
下面是最早用菌液PCR和其产物P的。
pcr条带弥散-2
yj2015042402.jpg
现在就一直是弥散的，不管用什么模板，条件都一样。请问有前辈能指导下吗？
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1楼 2015-04-28 17:09:54
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yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yaojie1889(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-29 18:51:53
你的引物是怎么保存的？有可能引物部分降解成段片段，扩增后就是这个样子。
换新的引物试试
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2楼2015-04-28 17:52:01
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yaojie1889

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-28 17:52:01
你的引物是怎么保存的？有可能引物部分降解成段片段，扩增后就是这个样子。
换新的引物试试

-20度 保存 。 平时用稀释为10um的。每次稀释100ul。都放-20度
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3楼2015-04-28 18:40:54
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永恒_99

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-28 17:52:01
你的引物是怎么保存的？有可能引物部分降解成段片段，扩增后就是这个样子。
换新的引物试试

您好，之前挑菌落PCR时，条带较简单，但是过了几天重新挑菌PCR时，出现了很多杂带，请问是什么原因呢。谢谢。
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4楼2015-04-29 23:04:16
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busen

铁虫 (初入文坛)
首先引物的特异性不好，非特异条带挺多的。还有，你们的maker好像也带有一点弥散，这样的话可能是你们配的凝胶有问题，可以换凝胶液重新电泳看一下。
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5楼2015-04-30 09:42:40
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