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lhf903

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[求助] DGGE切胶条带PCR产物弥散

DGGE后切胶，30ul无菌水浸泡过夜，以2ul为模板，25ul体系PCR，程序不变，产物弥散，且没有目标条带~

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1楼2013-11-11 12:59:17

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heijiwang

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我想知道怎么切胶，太薄了````

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2楼2013-11-11 14:35:52

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堍仔

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lhf903: 金币+20, ★有帮助 2013-11-14 12:02:44

我们都是用1 TE泡4摄氏度过夜的，要不你试试

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3楼2013-11-11 15:01:56

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Hazel张健

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

楼主上图来看下。
交流下~~楼主做的是细菌V3区吗？我也是出现产物弥散的现象，是局部小范围弥散，而且感觉还有稍大点的非特异产物。DGGE前含GC夹板以及DGGE后不含GC夹板都是扩增成那样。图一。
我用的是降落PCR，提高退火温度的范围试过，还是这个模样。
酶用的是TaKaRa 的高保真的EX-Taq。

图一.jpg

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4楼2013-11-11 17:10:22

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lhf903

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引用回帖:

4楼: Originally posted by Hazel张健 at 2013-11-11 17:10:22
楼主上图来看下。
交流下~~楼主做的是细菌V3区吗？我也是出现产物弥散的现象，是局部小范围弥散，而且感觉还有稍大点的非特异产物。DGGE前含GC夹板以及DGGE后不含GC夹板都是扩增成那样。图一。
我用的是降落PCR， ...

V3区以前做过，我用的是Promega的Super Mix，扩出来都很好，我觉得最大的问题应该是模板的问题~

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5楼2013-11-11 18:07:19

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