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alittlebirdy

铜虫 (初入文坛)

[求助] DGGE操作问题，PCR产物可以用几次？

我第一次做分子实验，PCR以后做DGGE取样需不需要在无菌条件下进行？会不会做一次DGGE就把PCR产物污染了，后面要再做就得重新PCR？求各位指点~
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1楼 2012-07-16 14:58:57
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elbo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
alittlebirdy: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-20 08:55:18
PCR产物最好纯化，我是将几次PCR产物合并放到一个PCR管里，每次跑完DGGE之后再-20放起来。下次继续用。换枪头情况下一般不会污染。
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2楼2012-07-16 18:18:19
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alittlebirdy

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by elbo at 2012-07-16 18:18:19
PCR产物最好纯化，我是将几次PCR产物合并放到一个PCR管里，每次跑完DGGE之后再-20放起来。下次继续用。换枪头情况下一般不会污染。

点样的过程不需要在超净台里进行吗，就是将loading buffer与模板混合的过程？我总感觉会有污染进入PCR管里。。
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3楼2012-07-17 00:00:49
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elbo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by alittlebirdy at 2012-07-17 00:00:49
点样的过程不需要在超净台里进行吗，就是将loading buffer与模板混合的过程？我总感觉会有污染进入PCR管里。。...

不用，平时的凝胶检测你在超净台里面跑吗？一个道理。拿出20ul pcr产物，与10ul loading buffer混合，点样就可以了。另外，你所说得污染是指什么？
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alittlebirdy
4楼2012-07-17 19:08:58
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alittlebirdy

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by elbo at 2012-07-17 19:08:58
不用，平时的凝胶检测你在超净台里面跑吗？一个道理。拿出20ul pcr产物，与10ul loading buffer混合，点样就可以了。另外，你所说得污染是指什么？...

我平时电泳检测的时候混样过程是在超净台里进行的，担心的问题跟这个一样~我说的污染就是有空气中的细菌或者DNA进入PCR管里，导致管里剩下的样品被污染，下次就不能用了~存在这个问题吗？我是新手，生怕做错了
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5楼2012-07-17 23:10:30
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elbo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by alittlebirdy at 2012-07-17 23:10:30
我平时电泳检测的时候混样过程是在超净台里进行的，担心的问题跟这个一样~我说的污染就是有空气中的细菌或者DNA进入PCR管里，导致管里剩下的样品被污染，下次就不能用了~存在这个问题吗？我是新手，生怕做错了...

哪来那么多污染啊。
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6楼2012-07-18 12:43:40
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alittlebirdy

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by elbo at 2012-07-18 12:43:40
哪来那么多污染啊。...

呵呵，好~那我就放心了~
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7楼2012-07-20 08:55:06
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