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永峰1230铜虫 (小有名气)
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[求助]
重组质粒 双酶切鉴定 条带大小问题 已有1人参与
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连接转化后 提取质粒， 双酶切鉴定， 如图所示：10000marker， 质粒，hind III 单酶切、XhoI 单酶切、 Hind III 和XhoI 双酶切。 双酶切之后在1000 bp处应该有目的基因的条带 1000 marker （10000、7000、4000、2000、1000、500、250）， 条带 酶切的比 质粒还要大！！！ 双酶切和 XhoI 单酶切 好像没有区别，这是咋么会事呢？  酶切鉴定.jpg |
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永峰1230
铜虫 (小有名气)
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谢谢你，，我再试一试， Hind III 是新买的，应该没问题， 这两个在http://www.thermoscientificbio.c ... st/?ca=doubledigest 网站上查过是可以 公用buffer的 ， 可能是你说的 质粒太多了 ，酶切动，，我再做一次 |
3楼2015-01-15 10:58:42
【答案】应助回帖
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从图看，是试剂盒提的质粒，质量非常高，基本上都是超螺旋的。超螺旋的质粒是跑的最快的，所以单酶切的质粒比超螺旋质粒跑的慢是正确的。但是Hind III单切泳道和超螺旋质粒泳道相似，貌似Hind III单切泳道质粒的量更大些，提示可能Hind III没有切动。双酶切和Xho I单切，大片段理论相差1000bp，但这种差异在胶上是很难看出来的，由于双酶切没有切出1000的条带，提示Xho I切开了Hind III没切开。 综合起来，Hind III酶没切动，可能是这个酶出问题了。建议换一支Hind III酶，再仔细检查下酶切缓冲液是否用对，同时注意双酶切的2个酶是否能共用buffer的问题。 另外，你酶切体系加的质粒太多了，建议适当减少。 [ 发自小木虫客户端 ] |
2楼2015-01-15 06:55:24
4楼2015-01-22 10:05:20
