24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2109  |  回复: 9

happywyh

铁虫 (小有名气)


[交流] 酶切验证条带不对

PCR产物和表达载体直接连,挑取转化子进行酶切验证,发现条带完全错误,一般有哪些原因导致这样的结果
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ilxly

木虫 (小有名气)



happywyh(金币+1): 谢谢参与
怎么个错误法 空载体还是切下来的大小不对?
yuany
2楼2012-06-19 09:27:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangfei179

木虫 (小有名气)



happywyh(金币+1): 谢谢参与
PCR产物建议先与T载体酶连转化,挑克隆子测序测验无误后再双酶切,与表达载体相连。否则引物非特异性很强的话,扩增的条带杂乱,酶切后当然条带不对。
3楼2012-06-19 14:14:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

byqyli

铁杆木虫 (正式写手)



happywyh(金币+1): 谢谢参与
可以对PCR产物回收后双酶切,再连接表达载体。
4楼2012-06-19 17:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happywyh

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by byqyli at 2012-06-19 17:26:48
可以对PCR产物回收后双酶切,再连接表达载体。

就是这样做的,但是酶切验证的时候发现条带大小不对,酶切位点也不对,压根就没对的地方,原因不明。
5楼2012-06-20 15:39:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

byqyli

铁杆木虫 (正式写手)


那么,你的PCR产物有没有测序看看?
6楼2012-06-21 08:49:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

byqyli

铁杆木虫 (正式写手)


引用回帖:
4楼: Originally posted by byqyli at 2012-06-19 17:26:48
可以对PCR产物回收后双酶切,再连接表达载体。

你的PCR产物要测序看看,正确了再连接表达载体。如果本身就不正确,怎么着都不对
7楼2012-06-21 08:50:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windsor2011

银虫 (小有名气)



happywyh(金币+1): 谢谢参与
最好是将PCR产物先进行酶切,再与载体进行连接,然后进行转化得到的单克隆提质粒进行没切鉴定,测序!在实验中必须要注意你酶切 的位点是否对,所用的酶是否正确?
8楼2012-06-21 09:23:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaolandragon

金虫 (正式写手)



happywyh(金币+1): 谢谢参与
你拿转化涂板长的菌落直接做酶切?
9楼2012-06-21 17:36:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianlt

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不要急功近利,一步步来,如果测序都没测,你确定没有在PCR时发生突变?你确定这就是你要的东东?本末倒置嘛
10楼2012-06-27 15:43:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 happywyh 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 080200学硕,机械工程专业277分,求带走! +7 瓶子PZ 2026-03-31 7/350 2026-04-05 17:49 by liucky
[考研] 08专硕275调剂 +4 AaAa7420 2026-04-05 4/200 2026-04-05 17:30 by chyhaha
[考研] 材料专硕283求调剂 +12 试试看呗 2026-04-04 13/650 2026-04-05 15:45 by wwytracy
[考研] 生物与医药调剂 +3 十七sa 2026-04-05 3/150 2026-04-05 13:28 by jp9609
[考研] 材料与化工363求推荐 +7 zh096 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:11 by 陌秋26
[考研] 301求调剂 +18 骆驼男人 2026-04-02 18/900 2026-04-04 20:33 by 蓝云思雨
[考研] 331求调剂 +3 niby 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:56 by 蓝云思雨
[考研] 363求调剂 +7 zh096 2026-04-04 7/350 2026-04-04 17:13 by dongzh2009
[考研] 291求调剂 +4 迷蒙木木 2026-04-01 5/250 2026-04-04 15:59 by sihailian3
[考研] 338求调剂 +4 zzz,,r 2026-04-03 4/200 2026-04-03 16:39 by lijunpoly
[考研] 313求调剂 +3 ~微微凉~ 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:25 by 啵啵啵0119
[考研] 330求调剂 +3 白神呜呼呼 2026-04-02 3/150 2026-04-03 10:15 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂22408 288分 +5 new382 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:13 by 醉在风里
[考研] 282求调剂 +13 呼吸都是减肥 2026-04-01 13/650 2026-04-02 14:10 by baoball
[考研] 311求调剂 +14 蓝月亮亮 2026-03-30 14/700 2026-04-02 12:18 by 1753564080
[考研] 08开头看过来!!! +4 wwwwffffff 2026-03-31 6/300 2026-04-02 11:42 by 均值回归
[考研] 0710生物学求调剂 +9 manman511 2026-04-01 9/450 2026-04-02 10:00 by zxl830724
[考研] 304求调剂 +12 素年祭语 2026-03-31 15/750 2026-04-01 22:41 by peike
[考研] 298求调剂 +4 什么是胖头鱼 2026-03-30 6/300 2026-04-01 22:06 by 客尔美德
[考研] 求调剂 +8 11ggg 2026-03-30 8/400 2026-03-31 13:56 by nanaliuyun
信息提示
请填处理意见