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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切验证条带不对
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happywyh

铁虫 (小有名气)

[交流] 酶切验证条带不对

PCR产物和表达载体直接连，挑取转化子进行酶切验证，发现条带完全错误，一般有哪些原因导致这样的结果
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1楼 2012-06-18 22:12:01
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windsor2011

银虫 (小有名气)
★
happywyh(金币+1): 谢谢参与
最好是将PCR产物先进行酶切，再与载体进行连接，然后进行转化得到的单克隆提质粒进行没切鉴定，测序！在实验中必须要注意你酶切 的位点是否对，所用的酶是否正确？
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8楼2012-06-21 09:23:09
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ilxly

木虫 (小有名气)
★
happywyh(金币+1): 谢谢参与
怎么个错误法 空载体还是切下来的大小不对?
yuany
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2楼2012-06-19 09:27:42
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wangfei179

木虫 (小有名气)
★
happywyh(金币+1): 谢谢参与
PCR产物建议先与T载体酶连转化，挑克隆子测序测验无误后再双酶切，与表达载体相连。否则引物非特异性很强的话，扩增的条带杂乱，酶切后当然条带不对。
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3楼2012-06-19 14:14:46
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byqyli

铁杆木虫 (正式写手)
★
happywyh(金币+1): 谢谢参与
可以对PCR产物回收后双酶切，再连接表达载体。
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4楼2012-06-19 17:26:48
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