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【求助/交流】请教一个克隆的问题，很棘手！ 已有4人参与
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| 最近在做一个克隆，一端是pmeI酶切，一端是EcoRI酶切，片段是300bp，载体大小是4.3kb左右，我将片段TA克隆后再用两个酶分别单酶切，单酶切时间尝试过4-5h,9-10h两种，中间用乙醇沉淀浓缩后换另一个酶切相同的时间后割胶回收连接，也尝试了用这两个酶一切做双酶切过夜后割胶回收连接，长出来的转化子提取质粒进行酶切验证，要么就是条带不对，要么就是空载，已经重复做了很多次，很是郁闷，请教这里的高手指点一下，盼回复了，谢谢！ |
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2楼2010-09-07 08:27:16
glidingwater
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5楼2010-09-07 09:48:36