应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提质粒的问题
91/1返回列表
查看: 3235  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liuwei78

铜虫 (小有名气)

[求助] 提质粒的问题

下图是我提的两次质粒。1、2泳道提的效果很差，不知道提出来的这个条带是缺刻还是双螺旋？3、4泳道条带是明显的，但是不清楚红线圈内的条带是什么。希望大家帮我解释下。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-08-03 11:34:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
liuwei78(金币+2): 2011-08-03 16:28:14
dhd997(金币+2): good 2011-08-09 07:17:29
不知道楼主这四个质粒是不是同一个质粒呢？
如果是的话，那1 2泳道很有可能是因为质粒量太少了而看不到底下那条带；你看看质粒的大小对不对，可以做个酶切看看质粒大小，这样保险一些；
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-08-03 11:59:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqchlorella

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
liuwei78(金币+2): 2011-08-03 16:28:23
dhd997(金币+2): good 2011-08-09 07:17:39
1，2只有1条带，是超螺旋，不利于后续的酶切等实验；
3，4为3条带，表明质粒提取过程非常好，质粒的质量很高。
赞一下(1人) 回复此楼
风一样的汉子
3楼2011-08-03 12:11:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liby

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+2): 2011-08-03 16:28:29
质粒以三种状态存在，线性，超螺旋，环状，所以三条带是对的。
赞一下 回复此楼
4楼2011-08-03 12:56:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maxiaojiaozl

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
liuwei78(金币+2): 2011-08-03 16:28:33
dhd997(金币+2): good 2011-08-09 07:17:50
四个不知道是不是一种质粒，提质粒不用maker,也是可以的，主要是有条带就证明提出来了，亮的自然是量多，而不明显是提得量少，如果是一种质粒应该会跟其中一些去蛋白的步骤有关。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-08-03 13:12:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
liuwei78(金币+5): 2011-08-03 16:25:45
dhd997(金币+2): good 2011-08-09 07:17:59
做酶切验证一下就知道了另外低拷贝质粒与高拷贝质粒跑出来的带型不一样是很正常的，即使同一种质粒，若在不同的受体细胞中，那么质粒条带都有可能不一样
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2011-08-03 14:15:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ytf149

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 欢迎多来交流 2011-08-09 07:18:19
liuwei78(金币+1): 2011-09-08 16:25:53
质粒提出来三个条带是对的啊，线性，超螺旋，环状，三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环，线形的质粒在中间，而开环的质粒在最后。
1 从细菌中大量提取的质粒电泳时，不一定均出现三条带，有时会出现两条，甚至一条(一般是超螺旋的质粒)，这跟上样量也有些关系。出现不同的结果都是由抽提质粒时的操作手法造成的。如果严格按照操作步骤，超螺旋的质粒会较多。
2 酶切将质粒线性化以后，才可以用mark判断大小。如果有三种构像，可以用中间那条带与mark比较判断大小。
3 酶切后线性化条带电泳时所处的位置就指示质粒的大小
赞一下(1人) 回复此楼
加油~
7楼2011-08-08 23:41:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+1): 2011-09-08 16:25:48
抽屉质粒电泳的时候有三条带，分别是超螺旋质粒（最快，完整的），线性质粒（完全被打断的那种）还有开环质粒（只有一条链被打断）。如果第三四条没有经过酶切的话，那只能认为提质粒的时候，不小心掺入了基因组片段了
赞一下 回复此楼
8楼2011-08-09 09:48:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+5): 2011-09-08 16:25:34
楼主这个图可以说提得惨不忍睹。1，2的产量太低，带型位置也更接近于缺刻质粒；3，4的杂质含量太高。所谓的质粒3条带应该都在超螺旋质粒的上方，下方出现很淡的带，按分子克隆的说法，属于质粒在强变性条件下处理过长，变成无规则卷曲构象，电泳大小约为正常带型的一半。这种情况多见于煮沸法，碱法提取质粒在加入溶液II，也就是NaOH+SDS溶液后静置时间过长也会出现，现在的试剂盒多采用减法，加入裂解液后溶液变澄清即可马上加入中和液（溶液III），不必等待。但这种变形带型对后续实验基本无影响，也可以完全不理它。
给楼主的建议：注意一下菌体的浓度以及和抽提液的比例，3，4这样的泳道应该记下所用的原始培养基的体积，下次提取的时候减半；电泳marker不要用DL2000，差的比较远。
赞一下 回复此楼
How about the future？
9楼2011-08-09 10:38:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liuwei78 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 言之凿凿，明天官网会通知放榜？ +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭