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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[求助] 提质粒的问题

下图是我提的两次质粒。1、2泳道提的效果很差,不知道提出来的这个条带是缺刻还是双螺旋?3、4泳道条带是明显的,但是不清楚红线圈内的条带是什么。希望大家帮我解释下。
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+5): 2011-09-08 16:25:34
楼主这个图可以说提得惨不忍睹。1,2的产量太低,带型位置也更接近于缺刻质粒;3,4的杂质含量太高。所谓的质粒3条带应该都在超螺旋质粒的上方,下方出现很淡的带,按分子克隆的说法,属于质粒在强变性条件下处理过长,变成无规则卷曲构象,电泳大小约为正常带型的一半。这种情况多见于煮沸法,碱法提取质粒在加入溶液II,也就是NaOH+SDS溶液后静置时间过长也会出现,现在的试剂盒多采用减法,加入裂解液后溶液变澄清即可马上加入中和液(溶液III),不必等待。但这种变形带型对后续实验基本无影响,也可以完全不理它。
给楼主的建议:注意一下菌体的浓度以及和抽提液的比例,3,4这样的泳道应该记下所用的原始培养基的体积,下次提取的时候减半;电泳marker不要用DL2000,差的比较远。
How about the future?
9楼2011-08-09 10:38:31
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