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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提质粒的问题
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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[求助] 提质粒的问题

下图是我提的两次质粒。1、2泳道提的效果很差，不知道提出来的这个条带是缺刻还是双螺旋？3、4泳道条带是明显的，但是不清楚红线圈内的条带是什么。希望大家帮我解释下。
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1楼 2011-08-03 11:34:41
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w2boluo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+5): 2011-09-08 16:25:34
楼主这个图可以说提得惨不忍睹。1，2的产量太低，带型位置也更接近于缺刻质粒；3，4的杂质含量太高。所谓的质粒3条带应该都在超螺旋质粒的上方，下方出现很淡的带，按分子克隆的说法，属于质粒在强变性条件下处理过长，变成无规则卷曲构象，电泳大小约为正常带型的一半。这种情况多见于煮沸法，碱法提取质粒在加入溶液II，也就是NaOH+SDS溶液后静置时间过长也会出现，现在的试剂盒多采用减法，加入裂解液后溶液变澄清即可马上加入中和液（溶液III），不必等待。但这种变形带型对后续实验基本无影响，也可以完全不理它。
给楼主的建议：注意一下菌体的浓度以及和抽提液的比例，3，4这样的泳道应该记下所用的原始培养基的体积，下次提取的时候减半；电泳marker不要用DL2000，差的比较远。
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How about the future？
9楼2011-08-09 10:38:31
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
liuwei78(金币+2): 2011-08-03 16:28:14
dhd997(金币+2): good 2011-08-09 07:17:29
不知道楼主这四个质粒是不是同一个质粒呢？
如果是的话，那1 2泳道很有可能是因为质粒量太少了而看不到底下那条带；你看看质粒的大小对不对，可以做个酶切看看质粒大小，这样保险一些；
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-08-03 11:59:25
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hqchlorella

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
liuwei78(金币+2): 2011-08-03 16:28:23
dhd997(金币+2): good 2011-08-09 07:17:39
1，2只有1条带，是超螺旋，不利于后续的酶切等实验；
3，4为3条带，表明质粒提取过程非常好，质粒的质量很高。
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风一样的汉子
3楼2011-08-03 12:11:00
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liby

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+2): 2011-08-03 16:28:29
质粒以三种状态存在，线性，超螺旋，环状，所以三条带是对的。
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4楼2011-08-03 12:56:33
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