| 查看: 2898 | 回复: 8 | |||
[求助]
提质粒的问题
|
下图是我提的两次质粒。1、2泳道提的效果很差，不知道提出来的这个条带是缺刻还是双螺旋？3、4泳道条带是明显的，但是不清楚红线圈内的条带是什么。希望大家帮我解释下。 |
回复此楼» 猜你喜欢
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有194人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 新手求助——质粒电泳条带问题
已经有15人回复
- 做酶切连接后转化再提质粒，质粒明显变小，Why???
已经有24人回复
- 酶切问题求助
已经有8人回复
- 提质粒出现4条带？
已经有15人回复
- 提质粒遇到问题
已经有13人回复
- 重组质粒双酶切问题
已经有5人回复
- 提质粒浓度太小，条带不亮，有图求真相
已经有20人回复
- 请教大家一个问题--提质粒
已经有8人回复
- 【求助/交流】片段转进去，提质粒酶切发现载体小了，想不明白
已经有19人回复
- 【求助/交流】提质粒后跑的电泳图
已经有10人回复
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16334.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3653
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
2楼2011-08-03 11:59:25
hqchlorella
铜虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 240.2
- 帖子: 71
- 在线: 55.8小时
- 虫号: 1253398
- 注册: 2011-04-02
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
；3楼2011-08-03 12:11:00
4楼2011-08-03 12:56:33
5楼2011-08-03 13:12:56
空谷幽风
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 32
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.05
- 金币: 1106.1
- 散金: 500
- 红花: 13
- 帖子: 615
- 在线: 116.5小时
- 虫号: 714271
- 注册: 2009-03-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2011-08-03 14:15:54
【答案】应助回帖
★ ★ ★
dhd997(金币+3): 欢迎多来交流 2011-08-09 07:18:19
liuwei78(金币+1): 2011-09-08 16:25:53
dhd997(金币+3): 欢迎多来交流 2011-08-09 07:18:19
liuwei78(金币+1): 2011-09-08 16:25:53
|
质粒提出来三个条带是对的啊，线性，超螺旋，环状，三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环，线形的质粒在中间，而开环的质粒在最后。 1 从细菌中大量提取的质粒电泳时，不一定均出现三条带，有时会出现两条，甚至一条(一般是超螺旋的质粒)，这跟上样量也有些关系。出现不同的结果都是由抽提质粒时的操作手法造成的。如果严格按照操作步骤，超螺旋的质粒会较多。 2 酶切将质粒线性化以后，才可以用mark判断大小。如果有三种构像，可以用中间那条带与mark比较判断大小。 3 酶切后线性化条带电泳时所处的位置就指示质粒的大小 |
7楼2011-08-08 23:41:04
8楼2011-08-09 09:48:38
w2boluo
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 4
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2006.6
- 红花: 1
- 帖子: 85
- 在线: 356.3小时
- 虫号: 1083233
- 注册: 2010-08-27
- 性别: GG
- 专业: 植物生殖生物学
【答案】应助回帖
liuwei78(金币+5): 2011-09-08 16:25:34
|
楼主这个图可以说提得惨不忍睹。1，2的产量太低，带型位置也更接近于缺刻质粒；3，4的杂质含量太高。所谓的质粒3条带应该都在超螺旋质粒的上方，下方出现很淡的带，按分子克隆的说法，属于质粒在强变性条件下处理过长，变成无规则卷曲构象，电泳大小约为正常带型的一半。这种情况多见于煮沸法，碱法提取质粒在加入溶液II，也就是NaOH+SDS溶液后静置时间过长也会出现，现在的试剂盒多采用减法，加入裂解液后溶液变澄清即可马上加入中和液（溶液III），不必等待。但这种变形带型对后续实验基本无影响，也可以完全不理它。 给楼主的建议：注意一下菌体的浓度以及和抽提液的比例，3，4这样的泳道应该记下所用的原始培养基的体积，下次提取的时候减半；电泳marker不要用DL2000，差的比较远。 |
9楼2011-08-09 10:38:31
