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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[求助] 提质粒的问题

下图是我提的两次质粒。1、2泳道提的效果很差,不知道提出来的这个条带是缺刻还是双螺旋?3、4泳道条带是明显的,但是不清楚红线圈内的条带是什么。希望大家帮我解释下。
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ytf149

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 欢迎多来交流 2011-08-09 07:18:19
liuwei78(金币+1): 2011-09-08 16:25:53
质粒提出来三个条带是对的啊,线性,超螺旋,环状,三种构像的质粒在琼脂糖电泳的前后顺序是超螺旋>线形>开环,线形的质粒在中间,而开环的质粒在最后。
1 从细菌中大量提取的质粒电泳时,不一定均出现三条带,有时会出现两条,甚至一条(一般是超螺旋的质粒),这跟上样量也有些关系。出现不同的结果都是由抽提质粒时的操作手法造成的。如果严格按照操作步骤,超螺旋的质粒会较多。
2 酶切将质粒线性化以后,才可以用mark判断大小。如果有三种构像,可以用中间那条带与mark比较判断大小。
3 酶切后线性化条带电泳时所处的位置就指示质粒的大小
加油~
7楼2011-08-08 23:41:04
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★
liuwei78(金币+2): 2011-08-03 16:28:14
dhd997(金币+2): good 2011-08-09 07:17:29
不知道楼主这四个质粒是不是同一个质粒呢?
如果是的话,那1 2泳道很有可能是因为质粒量太少了而看不到底下那条带;你看看质粒的大小对不对,可以做个酶切看看质粒大小,这样保险一些;
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-08-03 11:59:25
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hqchlorella

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
liuwei78(金币+2): 2011-08-03 16:28:23
dhd997(金币+2): good 2011-08-09 07:17:39
1,2只有1条带,是超螺旋,不利于后续的酶切等实验
3,4为3条带,表明质粒提取过程非常好,质粒的质量很高。
风一样的汉子
3楼2011-08-03 12:11:00
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liby

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

liuwei78(金币+2): 2011-08-03 16:28:29
质粒以三种状态存在,线性,超螺旋,环状,所以三条带是对的。
4楼2011-08-03 12:56:33
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