应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教大家一个问题--提质粒
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 2622  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

caojinxuan

银虫 (正式写手)

[求助] 请教大家一个问题--提质粒

我将保存在BL21中的质粒进行培养提质粒，具体操作是将100ul甘油菌加入5mlLB培养基中，同时加入卡那霉素（30ug/ml），摇床培养，可是都快2天了，培养基依旧是澄清的，请问这是什么原因啊？

[ Last edited by 1949stone on 2011-5-24 at 15:41 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
累事经年，仰天啸月间情感俱伤 纵马横川，剑指远峰处星河灿烂
1楼 2011-05-24 12:31:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lly198784

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-05-24 21:09:40
你保种的甘油管多久了？还有是放在多少温度下的，是保的菌液吗？一般出现这种情况主要是菌种保存时间过长，直接接试管很难活化出来，所以建议你先划线平板，长出来的单菌落接试管，这样应该就没有问题了，我都是这样做的。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-05-24 12:35:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by caojinxuan at 2011-05-24 12:31:12:
我将保存在BL21中的质粒进行培养提质粒，具体操作是将100ul甘油菌加入5mlLB培养基中，同时加入卡那霉素（30ug/ml），摇床培养，可是都快2天了，培养基依旧是澄清的，请问这是什么原因啊？

一般是先要划平板的，然后再跳单菌落在LB培养基大概200rpm 37℃培养，多摇几管，另外加卡那霉素的量是1mL培养基加1ul卡那霉素，5mL LB培养基应该加5uLkanamycin，也不要加多了。
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-24 14:28:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
caojinxuan(金币+1): 谢谢 2011-05-24 17:21:40
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励应助 2011-05-24 21:09:49
caojinxuan(金币+1): 谢谢 2011-11-17 09:55:09
引用回帖:
Originally posted by caojinxuan at 2011-05-24 12:31:12:
我将保存在BL21中的质粒进行培养提质粒，具体操作是将100ul甘油菌加入5mlLB培养基中，同时加入卡那霉素（30ug/ml），摇床培养，可是都快2天了，培养基依旧是澄清的，请问这是什么原因啊？

应该是菌株保存的问题，你想办法把菌株活化起来。
   菌株保存出问题的可能原因有：
（1）保存时菌株活化不充分，菌株量少
（2）保存菌株时，甘油量太少，菌株冻死了
（3）保存问题不对，菌株又在生长，死菌较多
    由于菌株保存不当引起菌株量少，那现在活化就要用非常办法了。
（1）扩大接种量，多接些甘油菌，转速放大，温度30，看能不能活化起来
（2）不加抗生素先培养，把菌先活化起来，当然也可以放大接种量，等活化起来后，在转接到有抗生素的培养基中
（3）先用固体培养基培养，在转接到液体培养基中，固体中开始也可以不加抗生素，等长出菌落后在利用抗生素筛选。
（4）在不行，就只能重新搞了
    “东西是活的，人是死的”,想想办法嘛，嘿嘿！
    祝你实验成功！！
赞一下(1人) 回复此楼
戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
4楼2011-05-24 14:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caojinxuan

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lly198784 at 2011-05-24 12:35:28:
你保种的甘油管多久了？还有是放在多少温度下的，是保的菌液吗？一般出现这种情况主要是菌种保存时间过长，直接接试管很难活化出来，所以建议你先划线平板，长出来的单菌落接试管，这样应该就没有问题了，我都是这 ...

保存大概5个月，放在-20保存的，保的是菌液，由于保存的较少，甘油菌液已经用完，那我可以从现在培养的菌液中取出部分划线培养吗？
赞一下 回复此楼
累事经年，仰天啸月间情感俱伤 纵马横川，剑指远峰处星河灿烂
5楼2011-05-24 17:25:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lly198784

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
Originally posted by caojinxuan at 2011-05-24 17:25:47:
保存大概5个月，放在-20保存的，保的是菌液，由于保存的较少，甘油菌液已经用完，那我可以从现在培养的菌液中取出部分划线培养吗？

可以用现在的菌液划线或者涂布，如果很稀，可以浓缩之后再划线。-20度保存五个月是不太好的，一般放在-80度冰箱就会活力下降的，而且建议你以后保种可以加大浓度。
赞一下 回复此楼
6楼2011-05-25 15:11:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你的菌应该是活力不行了，如果还有菌种的话还是先划线培养再筛选了，我觉得保存甘油菌最好还是在负70度，这样时间上可以长一些，活力也没下降。要是想在负20保存的话，可以试一下穿刺培养保存，但时间还是不要放太长了。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-05-25 16:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mxlo.o
8楼2012-03-02 19:15:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
285853楼: Originally posted by wuzuobin125 at 2011-05-25 16:24:47
你的菌应该是活力不行了，如果还有菌种的话还是先划线培养再筛选了，我觉得保存甘油菌最好还是在负70度，这样时间上可以长一些，活力也没下降。要是想在负20保存的话，可以试一下穿刺培养保存，但时间还是不要放太长 ...

穿刺菌不是应该在4°保存吗？在-20可以吗？菌不会被冻死吗？！
赞一下 回复此楼
9楼2012-08-28 18:58:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 caojinxuan 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物与医药求调剂 +5 heguanhua 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:58 by Hdyxbekcb
[考研] 262求调剂 +7 天下第一文 2026-04-04 8/400 2026-04-05 21:31 by 激流勇渡
[考研] 085600，320分求调剂 +7 大馋小子 2026-04-01 8/400 2026-04-05 21:19 by 学员8dgXkO
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:16 by 南航~万老师
[考研] 求调剂 +10 Hll胡 2026-04-04 10/500 2026-04-05 20:09 by nepu_uu
[考研] 353求调剂 +10 MayUxw1 2026-04-03 10/500 2026-04-05 09:23 by 无际的草原
[考研] 材料工程310专硕调剂 +13 捞捞我…. 2026-04-04 14/700 2026-04-05 09:01 by 来看流星雨10
[考研] 413求调剂 +4 柯某某 2026-03-31 4/200 2026-04-04 22:18 by 学员6BFVa3
[考研] 本科985，专业0812分336求调剂 +4 莫莫很行 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:31 by zhq0425
[考研] 335求调剂 +7 沈清璃 2026-04-03 7/350 2026-04-03 18:55 by lijunpoly
[考研] 266求调剂 +18 阳阳哇塞 2026-04-01 18/900 2026-04-03 18:38 by zllcz
[考研] 293求调剂 +5 末未mm 2026-04-02 6/300 2026-04-03 15:20 by 王保杰33
[考研] 330求调剂 +3 白神呜呼呼 2026-04-02 3/150 2026-04-03 10:15 by 蓝云思雨
[考研] 338求调剂，一志愿能源动力，外语是日语203 +5 zzz，，r 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:45 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:49 by liumengping
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 14:08 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 08工科求调剂290分 +5 1314捧花 2026-04-02 8/400 2026-04-02 13:16 by 乔哒哒哒
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 13:03 by yulian1987
[考研] 【求调剂】新能源材料本科，一志愿211，初试321 +6 求调剂学校， 2026-04-02 6/300 2026-04-02 09:41 by 晴空210210
[考研] 求调剂，一志愿北林食品与营养095500，301分，已过六级，有科研经历 +4 快乐储蓄罐 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:26 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭