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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

MolEPI: 7
应助: 6 (幼儿园)
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专业: 农业昆虫学

【答案】应助回帖

★ ★
caojinxuan(金币+1): 谢谢 2011-05-24 17:21:40
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励应助 2011-05-24 21:09:49
caojinxuan(金币+1): 谢谢 2011-11-17 09:55:09

引用回帖:

Originally posted by caojinxuan at 2011-05-24 12:31:12:
我将保存在BL21中的质粒进行培养提质粒，具体操作是将100ul甘油菌加入5mlLB培养基中，同时加入卡那霉素（30ug/ml），摇床培养，可是都快2天了，培养基依旧是澄清的，请问这是什么原因啊？

应该是菌株保存的问题，你想办法把菌株活化起来。
菌株保存出问题的可能原因有：
（1）保存时菌株活化不充分，菌株量少
（2）保存菌株时，甘油量太少，菌株冻死了
（3）保存问题不对，菌株又在生长，死菌较多
由于菌株保存不当引起菌株量少，那现在活化就要用非常办法了。
（1）扩大接种量，多接些甘油菌，转速放大，温度30，看能不能活化起来
（2）不加抗生素先培养，把菌先活化起来，当然也可以放大接种量，等活化起来后，在转接到有抗生素的培养基中
（3）先用固体培养基培养，在转接到液体培养基中，固体中开始也可以不加抗生素，等长出菌落后在利用抗生素筛选。
（4）在不行，就只能重新搞了
“东西是活的，人是死的”,想想办法嘛，嘿嘿！
祝你实验成功！！