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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提质粒遇到的问题 已有6人参与

今天小提质粒,第一步加了异丙醇之后,没有一点沉淀,请问可能是什么问题?
我是用pGL4.10载体做的连接,amp抗性。
会不会是扩增的时候染了杂菌,还是菌长过了?
请大家帮帮忙!谢谢!
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似水流年
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你手提的还是试剂盒提的?第一步怎么会加异丙醇呢?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-01-04 14:50:46
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-01-04 14:50:46:
你手提的还是试剂盒提的?第一步怎么会加异丙醇呢?

手提的,第一步重悬细胞,第二步裂解,之后加醋酸铵,转上清以后加异丙醇,发现没有一点点沉淀
似水流年
3楼2011-01-04 15:09:20
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+2):正解,鼓励积极参与~~~ 2011-01-04 15:51:18
引用回帖:
Originally posted by xiaoee2728 at 2011-01-04 15:09:20:

手提的,第一步重悬细胞,第二步裂解,之后加醋酸铵,转上清以后加异丙醇,发现没有一点点沉淀

为何要又沉淀,难道你是把:加异丙醇沉淀核酸。理解成了一定会有沉淀吗?

核酸那么小,即便是沉淀下来你能看到?当然了有时是会有沉淀,但是肉眼看见的沉淀并不是核酸(质粒),而是蛋白质等杂质,明白?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-01-04 15:14:32
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-01-04 15:14:32:


为何要又沉淀,难道你是把:加异丙醇沉淀核酸。理解成了一定会有沉淀吗?

核酸那么小,即便是沉淀下来你能看到?当然了有时是会有沉淀,但是肉眼看见的沉淀并不是核酸(质粒),而是蛋白质等杂质,明白?

这样啊,可是我之前做的时候一直都是有沉淀的,只是这一次没有,所以觉得很奇怪啊!
似水流年
5楼2011-01-04 15:34:03
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bigboy123

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
再做一遍试试,看是否有地方加错了。
供应PCR增量剂
6楼2011-01-04 15:50:21
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36894256

金虫 (小有名气)


rainwander(金币+1):有这可能~~~鼓励积极参与~~~ 2011-01-04 18:27:28
以我五年的经历判断是杂菌!!
7楼2011-01-04 16:11:45
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xiaoee2728 at 2011-01-04 15:34:03:

这样啊,可是我之前做的时候一直都是有沉淀的,只是这一次没有,所以觉得很奇怪啊!

你试试不就知道了嘛?所以试试吧!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
8楼2011-01-04 16:41:49
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DH5a

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):有道理~~~鼓励积极参与~~~ 2011-01-04 18:27:17
试剂盒和操作没有问题的话,那就是杂菌。
重新转化再抽
9楼2011-01-04 17:55:19
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by DH5a at 2011-01-04 17:55:19:
试剂盒和操作没有问题的话,那就是杂菌。
重新转化再抽

好的,多谢!
似水流年
10楼2011-01-04 18:28:43
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