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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提质粒遇到的问题
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提质粒遇到的问题 已有6人参与

今天小提质粒，第一步加了异丙醇之后，没有一点沉淀，请问可能是什么问题？
我是用pGL4.10载体做的连接，amp抗性。
会不会是扩增的时候染了杂菌，还是菌长过了？
请大家帮帮忙！谢谢！
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似水流年
1楼 2011-01-04 14:42:18
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你手提的还是试剂盒提的？第一步怎么会加异丙醇呢？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-01-04 14:50:46
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-01-04 14:50:46:
你手提的还是试剂盒提的？第一步怎么会加异丙醇呢？

手提的，第一步重悬细胞，第二步裂解，之后加醋酸铵，转上清以后加异丙醇，发现没有一点点沉淀
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似水流年
3楼2011-01-04 15:09:20
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2):正解，鼓励积极参与~~~ 2011-01-04 15:51:18
引用回帖:
Originally posted by xiaoee2728 at 2011-01-04 15:09:20:

手提的，第一步重悬细胞，第二步裂解，之后加醋酸铵，转上清以后加异丙醇，发现没有一点点沉淀

为何要又沉淀，难道你是把：加异丙醇沉淀核酸。理解成了一定会有沉淀吗？

核酸那么小，即便是沉淀下来你能看到？当然了有时是会有沉淀，但是肉眼看见的沉淀并不是核酸（质粒），而是蛋白质等杂质，明白？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-01-04 15:14:32
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-01-04 15:14:32:


为何要又沉淀，难道你是把：加异丙醇沉淀核酸。理解成了一定会有沉淀吗？

核酸那么小，即便是沉淀下来你能看到？当然了有时是会有沉淀，但是肉眼看见的沉淀并不是核酸（质粒），而是蛋白质等杂质，明白？

这样啊，可是我之前做的时候一直都是有沉淀的，只是这一次没有，所以觉得很奇怪啊！
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似水流年
5楼2011-01-04 15:34:03
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bigboy123

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
再做一遍试试，看是否有地方加错了。
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供应PCR增量剂
6楼2011-01-04 15:50:21
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36894256

金虫 (小有名气)
★
rainwander(金币+1):有这可能~~~鼓励积极参与~~~ 2011-01-04 18:27:28
以我五年的经历判断是杂菌！！
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7楼2011-01-04 16:11:45
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xiaoee2728 at 2011-01-04 15:34:03:

这样啊，可是我之前做的时候一直都是有沉淀的，只是这一次没有，所以觉得很奇怪啊！

你试试不就知道了嘛？所以试试吧！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
8楼2011-01-04 16:41:49
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DH5a

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):有道理~~~鼓励积极参与~~~ 2011-01-04 18:27:17
试剂盒和操作没有问题的话，那就是杂菌。
重新转化再抽
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9楼2011-01-04 17:55:19
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xiaoee2728

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by DH5a at 2011-01-04 17:55:19:
试剂盒和操作没有问题的话，那就是杂菌。
重新转化再抽

好的，多谢！
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似水流年
10楼2011-01-04 18:28:43
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