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happywyh

铁虫 (小有名气)


[交流] 酶切验证条带不对

PCR产物和表达载体直接连,挑取转化子进行酶切验证,发现条带完全错误,一般有哪些原因导致这样的结果
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wangfei179

木虫 (小有名气)



happywyh(金币+1): 谢谢参与
PCR产物建议先与T载体酶连转化,挑克隆子测序测验无误后再双酶切,与表达载体相连。否则引物非特异性很强的话,扩增的条带杂乱,酶切后当然条带不对。
3楼2012-06-19 14:14:46
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ilxly

木虫 (小有名气)



happywyh(金币+1): 谢谢参与
怎么个错误法 空载体还是切下来的大小不对?
yuany
2楼2012-06-19 09:27:42
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byqyli

铁杆木虫 (正式写手)



happywyh(金币+1): 谢谢参与
可以对PCR产物回收后双酶切,再连接表达载体。
4楼2012-06-19 17:26:48
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happywyh

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by byqyli at 2012-06-19 17:26:48
可以对PCR产物回收后双酶切,再连接表达载体。

就是这样做的,但是酶切验证的时候发现条带大小不对,酶切位点也不对,压根就没对的地方,原因不明。
5楼2012-06-20 15:39:58
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