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暖阳ny2

新虫 (初入文坛)

[求助] 帮忙看下电泳图，为什么沙门菌PCR后没有条带

如图所示，图1：孔1 是2000的Marker,孔2,3 是试剂盒提的沙门菌DNA（0.5μL）的PCR结果，孔4-7是煮沸法提金葡菌DNA的PCR结果，两者用相同的PCR体系和条件
图2：孔1 是2000的Marker,孔2-5是降低沙门菌DNA量（0.1μL）（为之前的1/5）后PCR结果，孔6是沙门菌总DNA结果，孔7为15000Marker
1、引物
16S (F)  5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'
16S (R)  5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'
2. PCR扩增体系：
在0.2 mL Eppendorf管中加入1μL DNA，再加入以下反应混合液：
  16S (F)            1μL (10μM)
  16S (R)            1μL (10μM)
  10×PCR Buffer      5 μL
  dNTP              4 μL
  Taq酶              0.5 μL
加ddH2O使反应体系调至50 μL，简单离心混匀。（体系等比例减半）
3. PCR反应
扩增条件为：
   94℃            3 min
   94℃            30 sec
   50℃            45 sec    35 cycles
   72℃            100 sec
   72℃            7 min

帮忙看下电泳图，为什么沙门菌PCR后没有条带
图1


帮忙看下电泳图，为什么沙门菌PCR后没有条带-1
图2
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1楼 2014-11-20 21:52:18
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