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暖阳ny2

新虫 (初入文坛)

[求助] 帮忙看下电泳图,为什么沙门菌PCR后没有条带

如图所示,图1:孔1 是2000的Marker,孔2,3 是试剂盒提的沙门菌DNA(0.5μL)的PCR结果,孔4-7是煮沸法提金葡菌DNA的PCR结果,两者用相同的PCR体系和条件
图2:孔1 是2000的Marker,孔2-5是降低沙门菌DNA量(0.1μL)(为之前的1/5)后PCR结果,孔6是沙门菌总DNA结果,孔7为15000Marker
1、引物
16S (F)  5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'
16S (R)  5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'
2. PCR扩增体系:
在0.2 mL Eppendorf管中加入1μL DNA,再加入以下反应混合液:
  16S (F)            1μL (10μM)
  16S (R)            1μL (10μM)
  10×PCR Buffer      5 μL
  dNTP              4 μL
  Taq酶              0.5 μL
加ddH2O使反应体系调至50 μL,简单离心混匀。(体系等比例减半)
3. PCR反应
扩增条件为:
   94℃            3 min
   94℃            30 sec
   50℃            45 sec    35 cycles
   72℃            100 sec
   72℃            7 min

帮忙看下电泳图,为什么沙门菌PCR后没有条带
图1


帮忙看下电泳图,为什么沙门菌PCR后没有条带-1
图2
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