应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 纯化蛋白质问题
131/2返回列表12下一页
查看: 2336  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 纯化蛋白质问题 已有4人参与

我的蛋白质等电点大约是5.6，做纯化蛋白质时用的裂解液为PH 8.0的tris缓冲液，300ml菌液加入了10ml的裂解液，超声破碎30min.然后直接过滤进行镍柱纯化，过镍柱时用的是咪唑梯度为25，50，100，150，250的tris缓冲液,pH=8.0。
图一是进行的蛋白质可溶性分析，上清中含量较高。为什么一经过镍柱蛋白几乎就没有了呢？图2为过镍柱的图

纯化蛋白质问题
蛋白质可溶性分析图片1.png


纯化蛋白质问题-1
纯化蛋白图片2.png
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生工检测理论与实务

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-13 11:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2026533696

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
流传了，没挂上柱子
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-13 20:07:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weebug

版主 (著名写手)
是什么蛋白呢？
回复此楼
天蓝蓝兮日头晒
3楼2014-08-14 11:18:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weebug at 2014-08-14 11:18:57
是什么蛋白呢？

可溶性的蛋白质
回复此楼
4楼2014-08-14 21:16:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weebug

版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
会不会是缓冲液的关系，都洗脱了。
赞一下 回复此楼
天蓝蓝兮日头晒
5楼2014-08-15 11:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyingsky305

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
超声波时间好像太长了。我一般500ml菌，10s on, 10s off, 有效处理时间1.5-2min，30％功率。
超声后，取40ul用于测可溶性，再上柱。如果蛋白可溶，但仍然不挂柱，可能是纯化标签被包埋到蛋白里面了，可将标签换到蛋白另外一端试试。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-15 14:37:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by weebug at 2014-08-15 11:44:37
会不会是缓冲液的关系，都洗脱了。

嗯，不太清楚呢，是每个浓度都有目的蛋白呢，要是这些合起来的话应该还浓些，如果是缓冲液的问题一般怎么处理呢
赞一下 回复此楼
7楼2014-08-15 19:50:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weebug

版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换另一种缓冲液。得做些功课，看哪一种适合。
赞一下 回复此楼
天蓝蓝兮日头晒
8楼2014-08-16 10:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by weebug at 2014-08-16 10:22:19
换另一种缓冲液。得做些功课，看哪一种适合。

谢谢啊，我换了缓冲液，并且咪唑梯度减少了，发现纯化浓度高了不少
赞一下 回复此楼
9楼2014-08-16 15:09:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by flyingsky305 at 2014-08-15 14:37:00
超声波时间好像太长了。我一般500ml菌，10s on, 10s off, 有效处理时间1.5-2min，30％功率。
超声后，取40ul用于测可溶性，再上柱。如果蛋白可溶，但仍然不挂柱，可能是纯化标签被包埋到蛋白里面了，可将标签换到蛋 ...

这个处理 时间会不会太短了啊，你的500ml菌加多少裂解液你，还有请问下那个纯化柱子用的是哪个公司的，谢谢
赞一下 回复此楼
10楼2014-08-16 15:11:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 flll2014 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 3/150 2026-08-30 20:19 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:50 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:40 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:29 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:07 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 17:36 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 17:14 by hZiFeudZyoGR
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:14 by l0VvVHGBGRLv
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:10 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭