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1楼2013-11-19 23:40:46

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wujun225

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【答案】应助回帖

从你的位置来看，应该是目的蛋白吸附太牢，你可以试试降低pH值1到2个单位再试试。过阳离子柱分不开只能是杂蛋白等电点相近，不只跑电泳带之间是否很近，如果很近的话说明分子量差不多，等电点差不多，可以用疏水柱子如phenyl hp试一试。如果很远的话说明分子量差很多，可以用superdex试一下。

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内敛低调

5楼2013-12-08 21:55:25

cpn

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乙腈，针对蛋白类。。
不加TFA或FA，蛋白或多肽的保留会很差，在反相柱上。

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11楼2014-01-07 15:26:34

普通回帖

lihuan0525

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你可以先去生物科学板块发帖，然后我可以告诉你把你的目的蛋白的等电点弄清楚了在来发帖，要不谁也帮不了你

2楼2013-11-20 08:44:34

edmundcui

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2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2013-11-20 08:44:34
你可以先去生物科学板块发帖，然后我可以告诉你把你的目的蛋白的等电点弄清楚了在来发帖，要不谁也帮不了你

因为它是未知的混合物，如何知道等电点？知道了它的等电点也不一定就是目的物质的吧？

3楼2013-11-20 08:53:42

lihuan0525

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3楼: Originally posted by edmundcui at 2013-11-20 08:53:42
因为它是未知的混合物，如何知道等电点？知道了它的等电点也不一定就是目的物质的吧？...

知道了等电点才能进一步明确怎么纯化

4楼2013-11-20 10:41:59

edmundcui

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5楼: Originally posted by wujun225 at 2013-12-08 21:55:25
从你的位置来看，应该是目的蛋白吸附太牢，你可以试试降低pH值1到2个单位再试试。过阳离子柱分不开只能是杂蛋白等电点相近，不只跑电泳带之间是否很近，如果很近的话说明分子量差不多，等电点差不多，可以用疏水柱子 ...

嗯，我试试看，跑胶条带相差大，10K下方总是一坨，几十K的也有条带，我用这个100%洗脱的样品过制备RP-HPLC，甲醇：水体系，梯度洗脱效果也不理想，像是完全没有吸附到C18柱上边。

6楼2013-12-11 15:16:50

wujun225

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6楼: Originally posted by edmundcui at 2013-12-11 08:16:50
嗯，我试试看，跑胶条带相差大，10K下方总是一坨，几十K的也有条带，我用这个100%洗脱的样品过制备RP-HPLC，甲醇：水体系，梯度洗脱效果也不理想，像是完全没有吸附到C18柱上边。...

额，一般多肽可以过RP-HPLC，你那个蛋白这样过的话估计变性了。你过阴离子交换柱可以降低pH，然后过superdex试试

内敛低调

7楼2013-12-14 18:39:17