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edmundcui

新虫 (初入文坛)

[求助] AKAT 蛋白纯化仪 分离纯化相关问题求助 已有2人参与

第一次注册小木虫,不知道来这个版发帖对不对?还望有人支持下哈,废话不熟了
我的目的是分离纯化活性物质,上样的样品是硫酸铵沉淀的蛋白粗样,等电点,分子量啥都不知道,过了DEAE柱子,缓冲液是tris-HCL,pH8.1,和1M的NaCl,pH8.1.最后活性检测发现100%流出的那个组分峰是我要的物质,再过CM柱,只有在非吸附那里有一个峰,跑SDS-PAGE,也分不开,求助各位怎么优化这个方法?或者有其他的建议也好?
AKAT 蛋白纯化仪 分离纯化相关问题求助
pc3-30%-DEAE-pc3-30%-DEAE-third.jpg
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cpn

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

lz你这10k以上的蛋白,过C18效果不好吧,蛋白一般用C4,C8会好一些。。。而且一般也不用甲醇当流动相,用乙腈-水体系,加TFA效果会比较好。
9楼2013-12-15 12:41:04
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cpn

木虫 (正式写手)

乙腈,针对蛋白类。。
不加TFA或FA,蛋白或多肽的保留会很差,在反相柱上。
11楼2014-01-07 15:26:34
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