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edmundcui

新虫 (初入文坛)

[求助] AKAT 蛋白纯化仪 分离纯化相关问题求助 已有2人参与

第一次注册小木虫,不知道来这个版发帖对不对?还望有人支持下哈,废话不熟了
我的目的是分离纯化活性物质,上样的样品是硫酸铵沉淀的蛋白粗样,等电点,分子量啥都不知道,过了DEAE柱子,缓冲液是tris-HCL,pH8.1,和1M的NaCl,pH8.1.最后活性检测发现100%流出的那个组分峰是我要的物质,再过CM柱,只有在非吸附那里有一个峰,跑SDS-PAGE,也分不开,求助各位怎么优化这个方法?或者有其他的建议也好?
AKAT 蛋白纯化仪 分离纯化相关问题求助
pc3-30%-DEAE-pc3-30%-DEAE-third.jpg
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

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引用回帖:
3楼: Originally posted by edmundcui at 2013-11-20 08:53:42
因为它是未知的混合物,如何知道等电点?知道了它的等电点也不一定就是目的物质的吧?...

知道了等电点才能进一步明确怎么纯化
4楼2013-11-20 10:41:59
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
你可以先去生物科学板块发帖,然后我可以告诉你把你的目的蛋白的等电点弄清楚了在来发帖,要不谁也帮不了你
2楼2013-11-20 08:44:34
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edmundcui

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lihuan0525 at 2013-11-20 08:44:34
你可以先去生物科学板块发帖,然后我可以告诉你把你的目的蛋白的等电点弄清楚了在来发帖,要不谁也帮不了你

因为它是未知的混合物,如何知道等电点?知道了它的等电点也不一定就是目的物质的吧?
3楼2013-11-20 08:53:42
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wujun225

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

从你的位置来看,应该是目的蛋白吸附太牢,你可以试试降低pH值1到2个单位再试试。过阳离子柱分不开只能是杂蛋白等电点相近,不只跑电泳带之间是否很近,如果很近的话说明分子量差不多,等电点差不多,可以用疏水柱子如phenyl hp试一试。如果很远的话说明分子量差很多,可以用superdex试一下。
内敛低调
5楼2013-12-08 21:55:25
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