纯化蛋白质问题 - 生物科学 - 蛋白/酶 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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新虫 (小有名气)

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引用回帖:

10楼: Originally posted by flll2014 at 2014-08-16 15:11:41
这个处理时间会不会太短了啊，你的500ml菌加多少裂解液你，还有请问下那个纯化柱子用的是哪个公司的，谢谢...

20ml。处理时间过长，蛋白容易变性。时间可以灵活些。可以用吸管吸一点，打出来不粘稠就行。
用的Qiagen Ni-NTA resin

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11楼2014-08-16 21:41:12

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捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

镍柱失效。
主要原因，可能是你缓冲液实际pH太高了。你测过配好缓冲液后的pH值吗？

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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】

12楼2014-08-16 22:23:39

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铜虫 (小有名气)

引用回帖:

11楼: Originally posted by flyingsky305 at 2014-08-16 21:41:12
20ml。处理时间过长，蛋白容易变性。时间可以灵活些。可以用吸管吸一点，打出来不粘稠就行。
用的Qiagen Ni-NTA resin
...

嗯，谢谢，我都是看蛋白质澄清度，若是看粘稠度也比较难吧，再超声前也不是很粘。我感觉超声时间长些上清含量会高些。还有问下如果在破菌液中加咪唑对蛋白会有影响吗，想在平衡液中也加低浓度20mM咪唑,来减少杂蛋白的吸附作用

13楼2014-08-17 11:14:32

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