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flyingsky305

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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10楼: Originally posted by flll2014 at 2014-08-16 15:11:41
这个处理 时间会不会太短了啊,你的500ml菌加多少裂解液你,还有请问下那个纯化柱子用的是哪个公司的,谢谢...

20ml。处理时间过长,蛋白容易变性。时间可以灵活些。可以用吸管吸一点,打出来不粘稠就行。
用的Qiagen Ni-NTA resin

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2014-08-16 21:41:12
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
镍柱失效。
主要原因,可能是你缓冲液实际pH太高了。你测过配好缓冲液后的pH值吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
12楼2014-08-16 22:23:39
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flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by flyingsky305 at 2014-08-16 21:41:12
20ml。处理时间过长,蛋白容易变性。时间可以灵活些。可以用吸管吸一点,打出来不粘稠就行。
用的Qiagen Ni-NTA resin
...

嗯,谢谢,我都是看蛋白质澄清度,若是看粘稠度也比较难吧,再超声前也不是很粘。我感觉超声时间长些上清含量会高些。还有问下如果在破菌液中加咪唑对蛋白会有影响吗,想在平衡液中也加低浓度20mM咪唑,来减少杂蛋白的吸附作用
13楼2014-08-17 11:14:32
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