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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 纯化蛋白质问题
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flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 纯化蛋白质问题 已有4人参与

我的蛋白质等电点大约是5.6，做纯化蛋白质时用的裂解液为PH 8.0的tris缓冲液，300ml菌液加入了10ml的裂解液，超声破碎30min.然后直接过滤进行镍柱纯化，过镍柱时用的是咪唑梯度为25，50，100，150，250的tris缓冲液,pH=8.0。
图一是进行的蛋白质可溶性分析，上清中含量较高。为什么一经过镍柱蛋白几乎就没有了呢？图2为过镍柱的图

纯化蛋白质问题
蛋白质可溶性分析图片1.png


纯化蛋白质问题-1
纯化蛋白图片2.png
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1楼 2014-08-13 11:12:42
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flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by flyingsky305 at 2014-08-16 21:41:12
20ml。处理时间过长，蛋白容易变性。时间可以灵活些。可以用吸管吸一点，打出来不粘稠就行。
用的Qiagen Ni-NTA resin
...

嗯，谢谢，我都是看蛋白质澄清度，若是看粘稠度也比较难吧，再超声前也不是很粘。我感觉超声时间长些上清含量会高些。还有问下如果在破菌液中加咪唑对蛋白会有影响吗，想在平衡液中也加低浓度20mM咪唑,来减少杂蛋白的吸附作用
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13楼2014-08-17 11:14:32
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2026533696

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
流传了，没挂上柱子
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2楼2014-08-13 20:07:39
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flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weebug at 2014-08-14 11:18:57
是什么蛋白呢？

可溶性的蛋白质
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4楼2014-08-14 21:16:10
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weebug

版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
会不会是缓冲液的关系，都洗脱了。
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天蓝蓝兮日头晒
5楼2014-08-15 11:44:37
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