应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 纯化蛋白质问题
51/1返回列表
查看: 1804  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 纯化蛋白质问题 已有4人参与

我的蛋白质等电点大约是5.6，做纯化蛋白质时用的裂解液为PH 8.0的tris缓冲液，300ml菌液加入了10ml的裂解液，超声破碎30min.然后直接过滤进行镍柱纯化，过镍柱时用的是咪唑梯度为25，50，100，150，250的tris缓冲液,pH=8.0。
图一是进行的蛋白质可溶性分析，上清中含量较高。为什么一经过镍柱蛋白几乎就没有了呢？图2为过镍柱的图

纯化蛋白质问题
蛋白质可溶性分析图片1.png


纯化蛋白质问题-1
纯化蛋白图片2.png
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生工检测理论与实务

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-13 11:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weebug at 2014-08-14 11:18:57
是什么蛋白呢？

可溶性的蛋白质
回复此楼
4楼2014-08-14 21:16:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

2026533696

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
流传了，没挂上柱子
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-13 20:07:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weebug

版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
会不会是缓冲液的关系，都洗脱了。
赞一下 回复此楼
天蓝蓝兮日头晒
5楼2014-08-15 11:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyingsky305

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
超声波时间好像太长了。我一般500ml菌，10s on, 10s off, 有效处理时间1.5-2min，30％功率。
超声后，取40ul用于测可溶性，再上柱。如果蛋白可溶，但仍然不挂柱，可能是纯化标签被包埋到蛋白里面了，可将标签换到蛋白另外一端试试。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-15 14:37:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭