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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 有关蛋白纯化的问题
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flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 有关蛋白纯化的问题 已有5人参与

我是做蛋白纯化的新手，请问下，我用tris缓冲液过镍柱纯化蛋白质后，再用PBS脱盐，这样可行吗，还有PD10脱盐时会把氯化钠给脱去吗，那脱完后的溶剂里面是不是就没有盐离子了呢
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1楼 2014-08-10 20:17:24
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jiangdaohang

禁虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
2楼2014-08-10 21:53:27
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wolfman840

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
youlinglyw: 金币+3 2014-08-12 23:25:04
纯化蛋白后的脱盐其实更准确说是叫作缓冲液置换，主要是考虑蛋白稳定性，一般来说，如果洗脱溶液会造成蛋白失活，就必须要进行缓冲液置换。一般置换，不会脱去所有离子，例如你用PBS去置换tris，置换率低的话，可能还有10%的tris在里面，但是不影响PBS对于蛋白质的缓冲作用。
所以脱盐更多是置换，不是把盐离子去除。
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3楼2014-08-11 10:26:26
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salanero2000

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
脱盐是层析还是透析呢？层析如果柱子够长够大，脱的会比较干净。
PD10是个啥？
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4楼2014-08-11 17:04:27
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flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-08-11 10:26:26
纯化蛋白后的脱盐其实更准确说是叫作缓冲液置换，主要是考虑蛋白稳定性，一般来说，如果洗脱溶液会造成蛋白失活，就必须要进行缓冲液置换。一般置换，不会脱去所有离子，例如你用PBS去置换tris，置换率低的话，可能 ...

谢谢，不过脱盐柱子好像主要是除去咪唑的
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5楼2014-08-12 20:14:26
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flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by salanero2000 at 2014-08-11 17:04:27
脱盐是层析还是透析呢？层析如果柱子够长够大，脱的会比较干净。
PD10是个啥？

PD10是脱盐柱子，脱盐是层析的，大约有10厘米长的
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6楼2014-08-12 20:22:41
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
脱盐还是除去咪唑等疏水小分子，最好直接用超滤和透析，用分子筛层析更换缓冲溶液可以，脱盐理论上可行，实际上效率比超滤和透析要低。
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7楼2014-08-13 00:21:53
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flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-08-13 00:21:53
脱盐还是除去咪唑等疏水小分子，最好直接用超滤和透析，用分子筛层析更换缓冲溶液可以，脱盐理论上可行，实际上效率比超滤和透析要低。

哦，好的，谢谢
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8楼2014-08-13 10:39:29
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flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-08-13 00:21:53
脱盐还是除去咪唑等疏水小分子，最好直接用超滤和透析，用分子筛层析更换缓冲溶液可以，脱盐理论上可行，实际上效率比超滤和透析要低。

超滤好像对蛋白损伤比较大吧
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9楼2014-08-16 15:13:51
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flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-08-11 10:26:26
纯化蛋白后的脱盐其实更准确说是叫作缓冲液置换，主要是考虑蛋白稳定性，一般来说，如果洗脱溶液会造成蛋白失活，就必须要进行缓冲液置换。一般置换，不会脱去所有离子，例如你用PBS去置换tris，置换率低的话，可能 ...

谢谢，我脱盐柱要是为了除咪唑，就是不确定会不会把氯化钠去除，如果没有氯化钠了，那么蛋白质可能会不稳定。
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10楼2014-08-16 15:16:02
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