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flll2014

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[交流] 有关蛋白纯化的问题已有5人参与

我是做蛋白纯化的新手，请问下，我用tris缓冲液过镍柱纯化蛋白质后，再用PBS脱盐，这样可行吗，还有PD10脱盐时会把氯化钠给脱去吗，那脱完后的溶剂里面是不是就没有盐离子了呢

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1楼 2014-08-10 20:17:24

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jiangdaohang

禁虫 (著名写手)

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2楼2014-08-10 21:53:27

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wolfman840

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youlinglyw: 金币+3 2014-08-12 23:25:04

纯化蛋白后的脱盐其实更准确说是叫作缓冲液置换，主要是考虑蛋白稳定性，一般来说，如果洗脱溶液会造成蛋白失活，就必须要进行缓冲液置换。一般置换，不会脱去所有离子，例如你用PBS去置换tris，置换率低的话，可能还有10%的tris在里面，但是不影响PBS对于蛋白质的缓冲作用。
所以脱盐更多是置换，不是把盐离子去除。

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3楼2014-08-11 10:26:26

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salanero2000

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脱盐是层析还是透析呢？层析如果柱子够长够大，脱的会比较干净。
PD10是个啥？

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4楼2014-08-11 17:04:27

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flll2014

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引用回帖:

3楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-08-11 10:26:26
纯化蛋白后的脱盐其实更准确说是叫作缓冲液置换，主要是考虑蛋白稳定性，一般来说，如果洗脱溶液会造成蛋白失活，就必须要进行缓冲液置换。一般置换，不会脱去所有离子，例如你用PBS去置换tris，置换率低的话，可能 ...

谢谢，不过脱盐柱子好像主要是除去咪唑的

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5楼2014-08-12 20:14:26

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