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flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 有关蛋白纯化的问题 已有5人参与

我是做蛋白纯化的新手,请问下,我用tris缓冲液过镍柱纯化蛋白质后,再用PBS脱盐,这样可行吗,还有PD10脱盐时会把氯化钠给脱去吗,那脱完后的溶剂里面是不是就没有盐离子了呢
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jiangdaohang

禁虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

2楼2014-08-10 21:53:27
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wolfman840

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
youlinglyw: 金币+3 2014-08-12 23:25:04
纯化蛋白后的脱盐其实更准确说是叫作缓冲液置换,主要是考虑蛋白稳定性,一般来说,如果洗脱溶液会造成蛋白失活,就必须要进行缓冲液置换。一般置换,不会脱去所有离子,例如你用PBS去置换tris,置换率低的话,可能还有10%的tris在里面,但是不影响PBS对于蛋白质的缓冲作用。
所以脱盐更多是置换,不是把盐离子去除。
3楼2014-08-11 10:26:26
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salanero2000

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
脱盐是层析还是透析呢?层析如果柱子够长够大,脱的会比较干净。
PD10是个啥?
4楼2014-08-11 17:04:27
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flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-08-11 10:26:26
纯化蛋白后的脱盐其实更准确说是叫作缓冲液置换,主要是考虑蛋白稳定性,一般来说,如果洗脱溶液会造成蛋白失活,就必须要进行缓冲液置换。一般置换,不会脱去所有离子,例如你用PBS去置换tris,置换率低的话,可能 ...

谢谢,不过脱盐柱子好像主要是除去咪唑的
5楼2014-08-12 20:14:26
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flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by salanero2000 at 2014-08-11 17:04:27
脱盐是层析还是透析呢?层析如果柱子够长够大,脱的会比较干净。
PD10是个啥?

PD10是脱盐柱子,脱盐是层析的,大约有10厘米长的
6楼2014-08-12 20:22:41
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
脱盐还是除去咪唑等疏水小分子,最好直接用超滤和透析,用分子筛层析更换缓冲溶液可以,脱盐理论上可行,实际上效率比超滤和透析要低。
7楼2014-08-13 00:21:53
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flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-08-13 00:21:53
脱盐还是除去咪唑等疏水小分子,最好直接用超滤和透析,用分子筛层析更换缓冲溶液可以,脱盐理论上可行,实际上效率比超滤和透析要低。

哦,好的,谢谢
8楼2014-08-13 10:39:29
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flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-08-13 00:21:53
脱盐还是除去咪唑等疏水小分子,最好直接用超滤和透析,用分子筛层析更换缓冲溶液可以,脱盐理论上可行,实际上效率比超滤和透析要低。

超滤好像对蛋白损伤比较大吧
9楼2014-08-16 15:13:51
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flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-08-11 10:26:26
纯化蛋白后的脱盐其实更准确说是叫作缓冲液置换,主要是考虑蛋白稳定性,一般来说,如果洗脱溶液会造成蛋白失活,就必须要进行缓冲液置换。一般置换,不会脱去所有离子,例如你用PBS去置换tris,置换率低的话,可能 ...

谢谢,我脱盐柱要是为了除咪唑,就是不确定会不会把氯化钠去除,如果没有氯化钠了,那么蛋白质可能会不稳定。
10楼2014-08-16 15:16:02
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