24小时热门版块排行榜    

查看: 2257  |  回复: 9

hchh2002

木虫 (小有名气)

[求助] 关于E-tag标记蛋白的纯化问题!~求助,谢谢帮忙~!

最近做单链抗体(SCFV)的原核表达,用的是PANAB5E载体,表达在E.coil HB2151中,以包涵体的形式存在。现在想把蛋白纯化一下,可是现在有个问题存在:
1,网上查到原来在安马西亚公司的E-tag纯化柱停产了,请问现在还有没什么方法可以纯化SCFV蛋白?这个蛋白是30kd左右。
2,蛋白是以包涵体存在,要复性再纯化还是先纯化后复性?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验室技巧

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hchh2002

木虫 (小有名气)

顶下问题哦~
2楼2012-05-23 09:50:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是否可以考虑做在变性条件下得纯化?
相信自己
3楼2012-06-14 13:21:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一般是变性复性之后再纯化
4楼2012-06-14 22:50:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


hchh2002: 金币+1, 有帮助, 谢谢帮助~! 2012-06-19 13:22:45
离心取包涵体,用1M-8M的尿素做预实验,看哪个浓度可以把你的东西溶了。先用低于这个浓度的尿素洗几遍,再溶解,一般都挺纯的。
5楼2012-06-16 22:57:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

或者重新克隆一下,带个His标签,8M尿素变性条件下过镍柱,纯的不得了。
6楼2012-06-16 22:58:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

蛋白质纯化除了亲和之外还可以采用离子交换,这个也是比较常用的手段,包涵体表达的蛋白很纠结,我以前也做过变性复兴,但是结果不是很好,是先变性再纯化的,不过还是建议你更换表达载体和宿主菌,
7楼2012-06-17 09:34:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuwolf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by whb21 at 2012-06-17 09:34:21
蛋白质纯化除了亲和之外还可以采用离子交换,这个也是比较常用的手段,包涵体表达的蛋白很纠结,我以前也做过变性复兴,但是结果不是很好,是先变性再纯化的,不过还是建议你更换表达载体和宿主菌,

严重同意
人生就是修行
8楼2012-06-17 09:59:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouqianyz

银虫 (正式写手)

楼主,我也是做单链抗体,但是买了好久都没有买到pCANTAB 5E载体,楼主能不能送我一点pCANTAB 5E载体,或是用实验室的资源交换,或是别的方式,谢谢啦
今天多吃点,明天再减肥!后天接着搞科研!
9楼2012-07-04 09:28:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wenqian0216

银虫 (初入文坛)

我现在也急需pCANTAB5E这个载体,什么方式都可以,现在买不到,重谢
10楼2012-09-07 18:27:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hchh2002 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-15 5/250 2026-03-15 18:38 by 无际的草原
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +3 腻腻gk 2026-03-14 3/150 2026-03-15 17:28 by 小物理化学
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +11 enenenhui 2026-03-13 12/600 2026-03-14 21:48 by laoshidan
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 求调剂 +5 鹤遨予卿 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:44 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-09 6/300 2026-03-14 02:14 by JourneyLucky
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
[基金申请] 提交后的基金本子,已让学校撤回了,可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
[考研] 一志愿:武汉理工,材料工程,英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
请填处理意见