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hchh2002

木虫 (小有名气)

[求助] 关于E-tag标记蛋白的纯化问题!~求助,谢谢帮忙~!

最近做单链抗体(SCFV)的原核表达,用的是PANAB5E载体,表达在E.coil HB2151中,以包涵体的形式存在。现在想把蛋白纯化一下,可是现在有个问题存在:
1,网上查到原来在安马西亚公司的E-tag纯化柱停产了,请问现在还有没什么方法可以纯化SCFV蛋白?这个蛋白是30kd左右。
2,蛋白是以包涵体存在,要复性再纯化还是先纯化后复性?
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hchh2002

木虫 (小有名气)

顶下问题哦~
2楼2012-05-23 09:50:19
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是否可以考虑做在变性条件下得纯化?
相信自己
3楼2012-06-14 13:21:07
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一般是变性复性之后再纯化
4楼2012-06-14 22:50:53
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
hchh2002: 金币+1, ★有帮助, 谢谢帮助~! 2012-06-19 13:22:45
离心取包涵体,用1M-8M的尿素做预实验,看哪个浓度可以把你的东西溶了。先用低于这个浓度的尿素洗几遍,再溶解,一般都挺纯的。
5楼2012-06-16 22:57:24
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

或者重新克隆一下,带个His标签,8M尿素变性条件下过镍柱,纯的不得了。
6楼2012-06-16 22:58:37
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

蛋白质纯化除了亲和之外还可以采用离子交换,这个也是比较常用的手段,包涵体表达的蛋白很纠结,我以前也做过变性复兴,但是结果不是很好,是先变性再纯化的,不过还是建议你更换表达载体和宿主菌,
7楼2012-06-17 09:34:21
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shuwolf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by whb21 at 2012-06-17 09:34:21
蛋白质纯化除了亲和之外还可以采用离子交换,这个也是比较常用的手段,包涵体表达的蛋白很纠结,我以前也做过变性复兴,但是结果不是很好,是先变性再纯化的,不过还是建议你更换表达载体和宿主菌,

严重同意
人生就是修行
8楼2012-06-17 09:59:50
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zhouqianyz

银虫 (正式写手)

楼主,我也是做单链抗体,但是买了好久都没有买到pCANTAB 5E载体,楼主能不能送我一点pCANTAB 5E载体,或是用实验室的资源交换,或是别的方式,谢谢啦
今天多吃点,明天再减肥!后天接着搞科研!
9楼2012-07-04 09:28:59
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wenqian0216

银虫 (初入文坛)

我现在也急需pCANTAB5E这个载体,什么方式都可以,现在买不到,重谢
10楼2012-09-07 18:27:43
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