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flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 有关蛋白纯化的问题 已有5人参与

我是做蛋白纯化的新手,请问下,我用tris缓冲液过镍柱纯化蛋白质后,再用PBS脱盐,这样可行吗,还有PD10脱盐时会把氯化钠给脱去吗,那脱完后的溶剂里面是不是就没有盐离子了呢
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
脱盐还是除去咪唑等疏水小分子,最好直接用超滤和透析,用分子筛层析更换缓冲溶液可以,脱盐理论上可行,实际上效率比超滤和透析要低。
7楼2014-08-13 00:21:53
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jiangdaohang

禁虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

2楼2014-08-10 21:53:27
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wolfman840

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
youlinglyw: 金币+3 2014-08-12 23:25:04
纯化蛋白后的脱盐其实更准确说是叫作缓冲液置换,主要是考虑蛋白稳定性,一般来说,如果洗脱溶液会造成蛋白失活,就必须要进行缓冲液置换。一般置换,不会脱去所有离子,例如你用PBS去置换tris,置换率低的话,可能还有10%的tris在里面,但是不影响PBS对于蛋白质的缓冲作用。
所以脱盐更多是置换,不是把盐离子去除。
3楼2014-08-11 10:26:26
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salanero2000

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
脱盐是层析还是透析呢?层析如果柱子够长够大,脱的会比较干净。
PD10是个啥?
4楼2014-08-11 17:04:27
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