应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于Hs tag 蛋白纯化后蛋白不纯的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 2057  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

匿名

用户注销 (初入文坛)
本帖仅楼主可见

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-16 01:08:43
已阅   同方向广播   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
回帖置顶 ( 共有1个 )

auroraA

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, BioEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-16 21:06:11
一般这种事不会发生.如果你考染看不出一条很突出的,明显强于其它band的band,说明表达不好.
极有可能是你的蛋白folding极其不好,和很多蛋白都抓到了一起,所以纯化不下来.一般这种蛋白的表达量也不会太高.lyse完反而少了,说明部分不溶.
切角回收是可以的.但是你要先知道你的蛋白的等电点,选一个合适的native gel,跑完后用ice cold 1M KCl染(但要求蛋白量达,因为sensitivity不高),把白色的band切下来,切丁,转入透析袋中(带有你想要的buffer),在DNA胶的tank里放入你需要的buffer, 把透析袋扔进去,"电泳"让蛋白跑出来,大概几个小时后就行了.
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-04-16 07:44:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流！ 2013-04-16 21:06:02
确定是杂蛋白吗？western鉴定是是否识别杂带？实在不行的话可以用native-page后切带做electro elute。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2013-04-16 03:54:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-16 21:06:19
首先你的蛋白表达量要有，其次通过改变诱导表达条件，尽量确保蛋白是可溶性表达，你的纯化初条件是怎么确定的，纯化用什么仪器来检测，都会影响最终的纯化效果
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-04-16 11:36:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

_小小鸟

金虫 (正式写手)

御林军

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-16 21:06:24
Ni柱纯化完，可以尝试用别的柱子比如DEAE，纯化是比较麻烦的，需要慢慢摸索吧
赞一下(1人) 回复此楼
一米阳光照大地。。。
5楼2013-04-16 20:20:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xissy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by auroraA at 2013-04-16 07:44:45
一般这种事不会发生.如果你考染看不出一条很突出的,明显强于其它band的band,说明表达不好.
极有可能是你的蛋白folding极其不好,和很多蛋白都抓到了一起,所以纯化不下来.一般这种蛋白的表达量也不会太高.lyse完反而 ...

KCl的负染，250mM的浓度就可以了吧？？
另外，负染下，目的蛋白的条带是透明的，背景是白色的吧？
赞一下 回复此楼
6楼2015-02-01 10:07:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

321wangke321

金虫 (正式写手)
请问，最后用的不纯蛋白做的EMSA，还是先改进了方法，进行了纯化？
赞一下 回复此楼
王者风范，一切皆有可能。
7楼2016-03-22 21:23:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 105611017 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程310专硕调剂 +14 捞捞我…. 2026-04-04 15/750 2026-04-06 14:18 by lqwchd
[考研] 295求调剂 +14 xndjjj 2026-04-04 15/750 2026-04-06 13:24 by 272061663
[考研] 求调剂！生物与医药专硕 +5 逆转陆先生 2026-04-01 6/300 2026-04-06 12:49 by lys0704
[考研] 0817化学工程与技术求调剂，一志愿中海洋319 +14 lv945 2026-04-04 14/700 2026-04-06 10:20 by 蓝云思雨
[考研] 301求调剂 +6 细胞相关蛋白 2026-04-02 10/500 2026-04-06 08:34 by jp9609
[考研] 材料调剂 +14 壹贰贰亿 2026-04-04 14/700 2026-04-05 23:31 by 来看流星雨10
[考研] 318求调剂 +11 ykyhsa 2026-04-05 13/650 2026-04-05 12:44 by aidndnjck
[考研] 考研调剂 +3 mcbbc 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:03 by barlinike
[考研] 材料调剂 +7 dxy调剂 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:15 by 陌秋26
[考研] 一志愿郑大0705求调剂 +3 橘十一 2026-04-02 4/200 2026-04-05 00:05 by chongya
[考研] 。 +5 雾与海 2026-04-02 6/300 2026-04-04 19:53 by 蓝云思雨
[考研] 291求调剂 +4 迷蒙木木 2026-04-01 5/250 2026-04-04 15:59 by sihailian3
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 321求调剂 +17 y-yh 2026-04-01 20/1000 2026-04-03 12:57 by y-yh
[考研] 312求调剂 +6 小小墨123 2026-04-02 7/350 2026-04-03 07:32 by jsw79
[考研] 085600 一志愿9 总分351 求调剂学校 +7 czhcz 2026-03-31 9/450 2026-04-01 19:24 by 无际的草原
[考研] 0703一志愿南师大334求调剂 +4 seven7yu 2026-03-30 4/200 2026-04-01 16:10 by oooqiao
[考研] 340求调剂 +4 希望如此i 2026-03-31 4/200 2026-03-31 16:40 by 690616278
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-31 4/200 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭