应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于Hs tag 蛋白纯化后蛋白不纯的问题
71/1返回列表
查看: 2327  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

匿名

用户注销 (初入文坛)
本帖仅楼主可见

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-16 01:08:43
已阅   同方向广播   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流！ 2013-04-16 21:06:02
确定是杂蛋白吗？western鉴定是是否识别杂带？实在不行的话可以用native-page后切带做electro elute。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2013-04-16 03:54:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

auroraA

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, BioEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-16 21:06:11
一般这种事不会发生.如果你考染看不出一条很突出的,明显强于其它band的band,说明表达不好.
极有可能是你的蛋白folding极其不好,和很多蛋白都抓到了一起,所以纯化不下来.一般这种蛋白的表达量也不会太高.lyse完反而少了,说明部分不溶.
切角回收是可以的.但是你要先知道你的蛋白的等电点,选一个合适的native gel,跑完后用ice cold 1M KCl染(但要求蛋白量达,因为sensitivity不高),把白色的band切下来,切丁,转入透析袋中(带有你想要的buffer),在DNA胶的tank里放入你需要的buffer, 把透析袋扔进去,"电泳"让蛋白跑出来,大概几个小时后就行了.
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-04-16 07:44:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-16 21:06:19
首先你的蛋白表达量要有，其次通过改变诱导表达条件，尽量确保蛋白是可溶性表达，你的纯化初条件是怎么确定的，纯化用什么仪器来检测，都会影响最终的纯化效果
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-04-16 11:36:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

_小小鸟

金虫 (正式写手)

御林军

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-16 21:06:24
Ni柱纯化完，可以尝试用别的柱子比如DEAE，纯化是比较麻烦的，需要慢慢摸索吧
赞一下(1人) 回复此楼
一米阳光照大地。。。
5楼2013-04-16 20:20:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xissy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by auroraA at 2013-04-16 07:44:45
一般这种事不会发生.如果你考染看不出一条很突出的,明显强于其它band的band,说明表达不好.
极有可能是你的蛋白folding极其不好,和很多蛋白都抓到了一起,所以纯化不下来.一般这种蛋白的表达量也不会太高.lyse完反而 ...

KCl的负染，250mM的浓度就可以了吧？？
另外，负染下，目的蛋白的条带是透明的，背景是白色的吧？
赞一下 回复此楼
6楼2015-02-01 10:07:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

321wangke321

金虫 (正式写手)
请问，最后用的不纯蛋白做的EMSA，还是先改进了方法，进行了纯化？
赞一下 回复此楼
王者风范，一切皆有可能。
7楼2016-03-22 21:23:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 105611017 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭