应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于Hs tag 蛋白纯化后蛋白不纯的问题
51/1返回列表
查看: 1804  |  回复: 6
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

匿名

用户注销 (初入文坛)
本帖仅楼主可见

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-04-16 01:08:43
已阅   同方向广播   申请BioEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

321wangke321

金虫 (正式写手)
请问，最后用的不纯蛋白做的EMSA，还是先改进了方法，进行了纯化？
赞一下 回复此楼
王者风范，一切皆有可能。
7楼2016-03-22 21:23:51
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流！ 2013-04-16 21:06:02
确定是杂蛋白吗？western鉴定是是否识别杂带？实在不行的话可以用native-page后切带做electro elute。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2013-04-16 03:54:41
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

auroraA

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, BioEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-16 21:06:11
一般这种事不会发生.如果你考染看不出一条很突出的,明显强于其它band的band,说明表达不好.
极有可能是你的蛋白folding极其不好,和很多蛋白都抓到了一起,所以纯化不下来.一般这种蛋白的表达量也不会太高.lyse完反而少了,说明部分不溶.
切角回收是可以的.但是你要先知道你的蛋白的等电点,选一个合适的native gel,跑完后用ice cold 1M KCl染(但要求蛋白量达,因为sensitivity不高),把白色的band切下来,切丁,转入透析袋中(带有你想要的buffer),在DNA胶的tank里放入你需要的buffer, 把透析袋扔进去,"电泳"让蛋白跑出来,大概几个小时后就行了.
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-04-16 07:44:45
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-16 21:06:19
首先你的蛋白表达量要有，其次通过改变诱导表达条件，尽量确保蛋白是可溶性表达，你的纯化初条件是怎么确定的，纯化用什么仪器来检测，都会影响最终的纯化效果
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-04-16 11:36:31
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭