应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 纯化蛋白质问题
131/2返回列表12下一页
查看: 1841  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 纯化蛋白质问题 已有4人参与

我的蛋白质等电点大约是5.6，做纯化蛋白质时用的裂解液为PH 8.0的tris缓冲液，300ml菌液加入了10ml的裂解液，超声破碎30min.然后直接过滤进行镍柱纯化，过镍柱时用的是咪唑梯度为25，50，100，150，250的tris缓冲液,pH=8.0。
图一是进行的蛋白质可溶性分析，上清中含量较高。为什么一经过镍柱蛋白几乎就没有了呢？图2为过镍柱的图

纯化蛋白质问题
蛋白质可溶性分析图片1.png


纯化蛋白质问题-1
纯化蛋白图片2.png
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生工检测理论与实务

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-13 11:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2026533696

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
流传了，没挂上柱子
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-13 20:07:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weebug

版主 (著名写手)
是什么蛋白呢？
回复此楼
天蓝蓝兮日头晒
3楼2014-08-14 11:18:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by weebug at 2014-08-14 11:18:57
是什么蛋白呢？

可溶性的蛋白质
回复此楼
4楼2014-08-14 21:16:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weebug

版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
会不会是缓冲液的关系，都洗脱了。
赞一下 回复此楼
天蓝蓝兮日头晒
5楼2014-08-15 11:44:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flyingsky305

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
超声波时间好像太长了。我一般500ml菌，10s on, 10s off, 有效处理时间1.5-2min，30％功率。
超声后，取40ul用于测可溶性，再上柱。如果蛋白可溶，但仍然不挂柱，可能是纯化标签被包埋到蛋白里面了，可将标签换到蛋白另外一端试试。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-08-15 14:37:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by weebug at 2014-08-15 11:44:37
会不会是缓冲液的关系，都洗脱了。

嗯，不太清楚呢，是每个浓度都有目的蛋白呢，要是这些合起来的话应该还浓些，如果是缓冲液的问题一般怎么处理呢
赞一下 回复此楼
7楼2014-08-15 19:50:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weebug

版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换另一种缓冲液。得做些功课，看哪一种适合。
赞一下 回复此楼
天蓝蓝兮日头晒
8楼2014-08-16 10:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by weebug at 2014-08-16 10:22:19
换另一种缓冲液。得做些功课，看哪一种适合。

谢谢啊，我换了缓冲液，并且咪唑梯度减少了，发现纯化浓度高了不少
赞一下 回复此楼
9楼2014-08-16 15:09:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by flyingsky305 at 2014-08-15 14:37:00
超声波时间好像太长了。我一般500ml菌，10s on, 10s off, 有效处理时间1.5-2min，30％功率。
超声后，取40ul用于测可溶性，再上柱。如果蛋白可溶，但仍然不挂柱，可能是纯化标签被包埋到蛋白里面了，可将标签换到蛋 ...

这个处理 时间会不会太短了啊，你的500ml菌加多少裂解液你，还有请问下那个纯化柱子用的是哪个公司的，谢谢
赞一下 回复此楼
10楼2014-08-16 15:11:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 flll2014 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] [复试调剂]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 环境工程调剂 +6 大可digkids 2026-03-16 6/300 2026-03-16 17:16 by barlinike
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 326求调剂 +4 上岸的小葡 2026-03-15 5/250 2026-03-16 08:39 by Linda Hu
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 268求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-14 6/300 2026-03-14 22:20 by 运气yunqi
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭