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纯化蛋白质问题 已有4人参与
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我的蛋白质等电点大约是5.6，做纯化蛋白质时用的裂解液为PH 8.0的tris缓冲液，300ml菌液加入了10ml的裂解液，超声破碎30min.然后直接过滤进行镍柱纯化，过镍柱时用的是咪唑梯度为25，50，100，150，250的tris缓冲液,pH=8.0。 图一是进行的蛋白质可溶性分析，上清中含量较高。为什么一经过镍柱蛋白几乎就没有了呢？图2为过镍柱的图  蛋白质可溶性分析图片1.png  纯化蛋白图片2.png |
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