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flll2014

铜虫 (小有名气)

[交流] 纯化蛋白质问题 已有4人参与

我的蛋白质等电点大约是5.6,做纯化蛋白质时用的裂解液为PH 8.0的tris缓冲液,300ml菌液加入了10ml的裂解液,超声破碎30min.然后直接过滤进行镍柱纯化,过镍柱时用的是咪唑梯度为25,50,100,150,250的tris缓冲液,pH=8.0。
图一是进行的蛋白质可溶性分析,上清中含量较高。为什么一经过镍柱蛋白几乎就没有了呢?图2为过镍柱的图

纯化蛋白质问题
蛋白质可溶性分析图片1.png


纯化蛋白质问题-1
纯化蛋白图片2.png
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flyingsky305

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by flll2014 at 2014-08-16 15:11:41
这个处理 时间会不会太短了啊,你的500ml菌加多少裂解液你,还有请问下那个纯化柱子用的是哪个公司的,谢谢...

20ml。处理时间过长,蛋白容易变性。时间可以灵活些。可以用吸管吸一点,打出来不粘稠就行。
用的Qiagen Ni-NTA resin

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2014-08-16 21:41:12
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2026533696

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
流传了,没挂上柱子
2楼2014-08-13 20:07:39
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flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by weebug at 2014-08-14 11:18:57
是什么蛋白呢?

可溶性的蛋白质
4楼2014-08-14 21:16:10
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weebug

版主 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
会不会是缓冲液的关系,都洗脱了。
天蓝蓝兮日头晒
5楼2014-08-15 11:44:37
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