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hajierlove

铜虫 (正式写手)

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[求助] 菌液pcr,坐等求助已有7人参与

今天做的菌液pcr，三个基因挑了48个单克隆，做菌液pcr，引物是M13通用引物，出来的目的条带都是250bp。750bp。目的片段是500bp。怎么回事？只能证明没有连接上吗？

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踏实

1楼 2014-07-23 20:33:08

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Neo2000

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-07-24 21:33:25

引用回帖:

8楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-24 02:25:30
个人意见，刚写出来的，边想边写，可能有错，仅供参考。

菌液PCR的假阳性的原因和解决方法(凌波丽，2014年7月24日)

1.建议楼主做阴性对照，阳性对照，检查是否存在污染。
2.假阳性可能的来源是未能和载体连接 ...

搞个最简单的菌液PCR，版主你想多了，如果是转基因检测等很严谨的实验尚可考虑，一般的菌液PCR做不出来，只能说你还没学会，经验积累不够。我们做克隆后，菌液PCR就用国产的mix，很便宜，尽量用通用引物，做了这么多年，一直都OK的，没说要换好酶，加这个试剂那个试剂的。我们加样就在外面加的，跑电泳结果以及测序都很ok的。最后，我只能弱弱的说一句，信文献说的不如信自己做的。

[ 发自小木虫客户端 ]

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