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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌液pcr,坐等求助
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

[求助] 菌液pcr,坐等求助 已有7人参与

今天做的菌液pcr，三个基因挑了48个单克隆，做菌液pcr，引物是M13通用引物，出来的目的条带都是250bp。750bp。目的片段是500bp。怎么回事？只能证明没有连接上吗？
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踏实
1楼 2014-07-23 20:33:08
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+4, 鼓励回帖交流！ 2014-07-24 21:33:25
引用回帖:
8楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-24 02:25:30
个人意见，刚写出来的，边想边写，可能有错，仅供参考。

菌液PCR的假阳性的原因和解决方法(凌波丽，2014年7月24日)

1.建议楼主做阴性对照，阳性对照，检查是否存在污染。
2.假阳性可能的来源是未能和载体连接 ...

搞个最简单的菌液PCR，版主你想多了，如果是转基因检测等很严谨的实验尚可考虑，一般的菌液PCR做不出来，只能说你还没学会，经验积累不够。我们做克隆后，菌液PCR就用国产的mix，很便宜，尽量用通用引物，做了这么多年，一直都OK的，没说要换好酶，加这个试剂那个试剂的。我们加样就在外面加的，跑电泳结果以及测序都很ok的。最后，我只能弱弱的说一句，信文献说的不如信自己做的。

[ 发自小木虫客户端 ]
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16楼2014-07-24 21:16:59
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
你用自己的引物跑p呀！干嘛用m13

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好好搞学术
2楼2014-07-23 21:26:20
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胡亚梅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hajierlove(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:31:32
引物特异性不行啊，建议自己根据目的条带设计会更靠谱一些
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小虫虫~~
3楼2014-07-23 21:40:31
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:31:40
做阴性对照了吗？用的是什么T载体？查下通用引物之间的距离。
应该是连接转化成功了，M13通用引物扩增空载体的产物大小一般是200bp左右。这样加上你的目的片段大小应该就是对的。
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4楼2014-07-23 22:23:16
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