24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1448  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

love犬夜叉

木虫 (小有名气)

[求助] T载连接后进行双酶切结果什么都没有了 已有2人参与

我是做定点突变,将突变的片段连到T载上,测序验证,用菌落PCR检验的时候都有目的条带,提的质粒也比19T的条带要大些,就是条带不止三条,差不多有五六条的样子,然后双酶切,做了几次了,都是一跑胶检测就是什么条带都看不到了,泳道也没有明显的亮带,的酶切体系是质粒7μl,BamH I 0.2,Hind III o.2,10X K Buffer 1,ddH2O 1.6,时间有过夜,也有4、5个小时的,以前构过T载,也做过双酶切, 但是都没有出现过这样的情况,求助啊!!!!!!实验进度拖得太久了~~~~(>_<~~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

justloveinuyasha
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aayqaa

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aayqaa at 2014-06-27 20:00:13
1,质粒能提出五六条带?建议还是用试剂盒提吧,用试剂盒一般都是一两条带,试剂盒也不贵。
2,PCR鉴定还是很不可靠的,你的引物是否特异性不是很好?
3,酶切体系太小了,鉴定时目的条带往往比较淡,很有可能看不 ...

20微升
4楼2014-06-27 20:11:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

love犬夜叉

木虫 (小有名气)

对了,补充下,有拿菌液去测序但是没有信号,提的质粒做PCR,虽然有的没有P出来,但是还是有P出来的,可是酶切的时候都没有任何条带
justloveinuyasha
2楼2014-06-27 17:00:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-06-27 22:18:14
1,质粒能提出五六条带?建议还是用试剂盒提吧,用试剂盒一般都是一两条带,试剂盒也不贵。
2,PCR鉴定还是很不可靠的,你的引物是否特异性不是很好?
3,酶切体系太小了,鉴定时目的条带往往比较淡,很有可能看不到,建议2微升酶切体系跑胶时全部加到一个孔里
3楼2014-06-27 20:00:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eaeas12

禁虫 (初入文坛)


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-07-15 20:54:21
本帖内容被屏蔽

5楼2014-06-29 23:11:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 新一代电子信息294求调剂 不挑学校 +7 Ytyt11 2026-04-09 8/400 2026-04-12 16:57 by ajpv风雷
[考研] 一志愿西北工业大学289 085602 +33 yang婷 2026-04-10 34/1700 2026-04-12 08:11 by Art1977
[考研] 一志愿郑州大学 22408 305分求调剂 +5 安小满zzz 2026-04-08 5/250 2026-04-12 00:41 by 蓝云思雨
[考研] 291分调剂 +5 上岸小莹加油 2026-04-09 6/300 2026-04-11 21:06 by 逆水乘风
[考研] 调剂 +6 青灯不负 2026-04-09 6/300 2026-04-11 20:35 by dongdian1
[考研] 085410 273分调剂 +4 X1999 2026-04-09 4/200 2026-04-11 13:05 by pies112
[考研] 还有化工二轮调剂的学校吗 5+14 化工人999 2026-04-09 48/2400 2026-04-11 10:27 by 89436494
[考研] 吉大计算机技术331分,英语六级,求调剂 +3 峰峰021116 2026-04-09 3/150 2026-04-10 20:01 by chemisry
[考研] 中科院总分315求调剂 +8 lallalh 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:30 by dick_runner
[考研] 285求调剂 +9 AZMK 2026-04-07 11/550 2026-04-10 15:24 by AZMK
[考研] 一志愿华东师范生物学326分,求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 本科西工大 0856 324求调剂 +10 wysyjs25 2026-04-09 11/550 2026-04-10 08:37 by 5268321
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 一志愿吉大化学327求调剂 +12 王王白石 2026-04-06 13/650 2026-04-08 16:05 by luoyongfeng
[考研] 电子信息346 +4 zuoshaodian 2026-04-08 4/200 2026-04-08 11:54 by zzucheup
[考研] 287求调剂 +6 Fnhc 2026-04-07 6/300 2026-04-08 10:05 by xingguangj
[考研] 22408 318分求调剂 +4 勤奋的小笼包 2026-04-06 6/300 2026-04-07 15:05 by 纸鹤555
[考研] 22408 331分求调剂 +4 y__1 2026-04-06 4/200 2026-04-06 17:26 by 土木硕士招生
信息提示
请填处理意见