24小时热门版块排行榜    

查看: 1418  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

love犬夜叉

木虫 (小有名气)

[求助] T载连接后进行双酶切结果什么都没有了 已有2人参与

我是做定点突变,将突变的片段连到T载上,测序验证,用菌落PCR检验的时候都有目的条带,提的质粒也比19T的条带要大些,就是条带不止三条,差不多有五六条的样子,然后双酶切,做了几次了,都是一跑胶检测就是什么条带都看不到了,泳道也没有明显的亮带,的酶切体系是质粒7μl,BamH I 0.2,Hind III o.2,10X K Buffer 1,ddH2O 1.6,时间有过夜,也有4、5个小时的,以前构过T载,也做过双酶切, 但是都没有出现过这样的情况,求助啊!!!!!!实验进度拖得太久了~~~~(>_<~~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

justloveinuyasha
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aayqaa

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aayqaa at 2014-06-27 20:00:13
1,质粒能提出五六条带?建议还是用试剂盒提吧,用试剂盒一般都是一两条带,试剂盒也不贵。
2,PCR鉴定还是很不可靠的,你的引物是否特异性不是很好?
3,酶切体系太小了,鉴定时目的条带往往比较淡,很有可能看不 ...

20微升
4楼2014-06-27 20:11:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

love犬夜叉

木虫 (小有名气)

对了,补充下,有拿菌液去测序但是没有信号,提的质粒做PCR,虽然有的没有P出来,但是还是有P出来的,可是酶切的时候都没有任何条带
justloveinuyasha
2楼2014-06-27 17:00:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-06-27 22:18:14
1,质粒能提出五六条带?建议还是用试剂盒提吧,用试剂盒一般都是一两条带,试剂盒也不贵。
2,PCR鉴定还是很不可靠的,你的引物是否特异性不是很好?
3,酶切体系太小了,鉴定时目的条带往往比较淡,很有可能看不到,建议2微升酶切体系跑胶时全部加到一个孔里
3楼2014-06-27 20:00:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eaeas12

禁虫 (初入文坛)


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-07-15 20:54:21
本帖内容被屏蔽

5楼2014-06-29 23:11:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 考研调剂 +4 来好运来来来 2026-03-21 4/200 2026-03-22 12:15 by 星空星月
[考研] 354求调剂 +7 Tyoumou 2026-03-18 10/500 2026-03-22 11:11 by 人来盛
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +7 梨花珞晚风 2026-03-17 7/350 2026-03-22 10:03 by 2026paper
[考研] 一志愿华中科技大学071000,求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 070300化学319求调剂 +7 锦鲤0909 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:46 by JourneyLucky
[考研] 083200学硕321分一志愿暨南大学求调剂 +3 innocenceF 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:35 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 271材料工程求调剂 +8 .6lL 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:58 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 281求调剂(0805) +14 烟汐忆海 2026-03-16 25/1250 2026-03-20 15:47 by yuncha
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
信息提示
请填处理意见