24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1300  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

love犬夜叉

木虫 (小有名气)

[求助] T载连接后进行双酶切结果什么都没有了已有2人参与

我是做定点突变,将突变的片段连到T载上,测序验证,用菌落PCR检验的时候都有目的条带,提的质粒也比19T的条带要大些,就是条带不止三条,差不多有五六条的样子,然后双酶切,做了几次了,都是一跑胶检测就是什么条带都看不到了,泳道也没有明显的亮带,的酶切体系是质粒7μl,BamH I 0.2,Hind III o.2,10X K Buffer 1,ddH2O 1.6,时间有过夜,也有4、5个小时的,以前构过T载,也做过双酶切, 但是都没有出现过这样的情况,求助啊!!!!!!实验进度拖得太久了~~~~(>_<~~~~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

justloveinuyasha
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-06-27 22:18:14
1,质粒能提出五六条带?建议还是用试剂盒提吧,用试剂盒一般都是一两条带,试剂盒也不贵。
2,PCR鉴定还是很不可靠的,你的引物是否特异性不是很好?
3,酶切体系太小了,鉴定时目的条带往往比较淡,很有可能看不到,建议2微升酶切体系跑胶时全部加到一个孔里
3楼2014-06-27 20:00:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

love犬夜叉

木虫 (小有名气)

对了,补充下,有拿菌液去测序但是没有信号,提的质粒做PCR,虽然有的没有P出来,但是还是有P出来的,可是酶切的时候都没有任何条带
justloveinuyasha
2楼2014-06-27 17:00:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aayqaa

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aayqaa at 2014-06-27 20:00:13
1,质粒能提出五六条带?建议还是用试剂盒提吧,用试剂盒一般都是一两条带,试剂盒也不贵。
2,PCR鉴定还是很不可靠的,你的引物是否特异性不是很好?
3,酶切体系太小了,鉴定时目的条带往往比较淡,很有可能看不 ...

20微升
4楼2014-06-27 20:11:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eaeas12

禁虫 (初入文坛)


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-07-15 20:54:21
本帖内容被屏蔽

5楼2014-06-29 23:11:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见