| 查看: 2542 | 回复: 10 | ||
[求助]
质粒是PCR产物，片段是磷酸化的，易自连，求连接体系中二者的比例，希望高手指点已有5人参与
|
||
| 大家好，最近做连接转化，我想请教大家一个问题，我现在的质粒是1700 bp,自己构建的，PCR产物，两端都是-OH，不会自连；而插入的片段是大小不等的片段，大小在200-2000 bp，现在准备做连接，基于质粒不会自连，片段易自连，而且大小差距不大，我打算将载体浓度提高，为载体：目的片段=5:1和10:1，主要是想把载体质粒连接上去，不然全是片段的自连，不知道可行不？谢谢前辈指点 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有294人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
重组质粒构建 连接转化效率低 求帮助啊
已经有19人回复- 眼含热泪求助：pcDNA3.1 插入4000bp 质粒构建，大虾请留步
已经有6人回复
- 载体去磷酸化后的回收问题
已经有21人回复
- 连接不成功，跪求指导！
已经有26人回复
- Sac1和Xho1的双酶切连接
已经有5人回复
- 关于使载体平末端环化的问题
已经有14人回复
- 急求:PCR 产物连接转化 涂板后就是不长 到底是怎么回事啊
已经有5人回复
- 2.7Kb的片段连接问题
已经有6人回复
- 求助--双酶切连接构质粒
已经有15人回复
- 质粒与片段的连接
已经有9人回复
- 有没有用过XmnI这个酶的?酶切后连接需要注意什么问题么？
已经有12人回复
- 平末端连接不上，求助
已经有21人回复
- 单酶切的大片段连接转化及多个片段的连接转化问题
已经有8人回复
- 双酶切之后，线状质粒的连接问题
已经有13人回复
- 关于基因重组过程中的去磷酸化和连接
已经有4人回复
- 酶切酶连转化后单克隆检测不对
已经有8人回复
- 无模板pcr合成短片段 一直失败
已经有44人回复
- 虚心请教关于平—粘末端的连接问题
已经有18人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 在基因重组过程中，怎样鉴别质粒载体是否被限制性内切酶切好？
已经有10人回复
- 【求助/交流】关于重组质粒的构建，总是失败，希望高手指点一下啊～～
已经有16人回复
- 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】长片段的连接转化
已经有9人回复
5楼2014-06-04 14:11:31
杰-米尼
银虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1369.3
- 散金: 10
- 帖子: 153
- 在线: 40.7小时
- 虫号: 2018602
- 注册: 2012-09-21
- 性别: MM
- 专业: 植物生理与生化
6楼2014-06-04 16:17:47
8楼2014-06-05 05:38:03
9楼2014-06-06 17:40:15
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- MolEPI: 1
- 应助: 905 (博后)
- 金币: 16466.5
- 散金: 1654
- 红花: 120
- 沙发: 39
- 帖子: 14449
- 在线: 2169.9小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
10楼2014-06-09 09:28:59
2楼2014-06-03 17:53:45
3楼2014-06-03 18:28:15
4楼2014-06-03 18:28:37
7楼2014-06-04 20:29:25