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liuyil

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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注册: 2012-12-18
性别: MM
专业: 动物遗传学

[求助] 质粒是PCR产物，片段是磷酸化的，易自连，求连接体系中二者的比例，希望高手指点已有5人参与

大家好，最近做连接转化，我想请教大家一个问题，我现在的质粒是1700 bp,自己构建的，PCR产物，两端都是-OH，不会自连；而插入的片段是大小不等的片段，大小在200-2000 bp，现在准备做连接，基于质粒不会自连，片段易自连，而且大小差距不大，我打算将载体浓度提高，为载体：目的片段=5:1和10:1，主要是想把载体质粒连接上去，不然全是片段的自连，不知道可行不？谢谢前辈指点

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未来不知道会怎么样，做好当下最重要。

1楼 2014-06-03 17:42:20

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杰-米尼

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuyil: 金币+1 2014-06-04 20:29:34
liuyil: 金币+1, ★有帮助 2014-06-11 13:03:39

我们这里一般载体和片段的摩尔比是1:3—3:1这个范围，最常用的是1:3
你的载体有抗性吗？要是有抗性的话片段自连也无所谓的

赞一下(1人)

做科研还是需要好的逻辑能力的加油

6楼2014-06-04 16:17:47

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