| 查看: 2259 | 回复: 9 | ||
lly198784木虫 (正式写手)
|
[求助]
质粒与片段的连接
|
| 我最近在构建一个重组质粒，因为酶切位点只剩下XbaI可以选择，所以只能XbaI单连，用此酶单酶切空质粒是切出一条很亮的条带的，然后去磷酸化后与酶切后的片段按照摩尔比1：3，1:5,1:10进行了10微升和16微升的连接体系用快速连接酶solution I连接了5个小时，但是做了好几次，结果都是无任何克隆长出，质粒大小是5809bp， 片段是5399 bp，是不是因为两个都太长且比较相近所以很难连接吗？我之前用同样的XbaI单连另外一个载体是成功的，但是那个重组质粒总长7000多bp。请懂的大侠们支招啊？做了一个月了，感觉很失败啊，以前我构建都是一次性或者两次就成功的。 |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有177人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有8人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- ApaI酶切位点保护碱基
已经有3人回复
- 双酶切之后，线状质粒的连接问题
已经有13人回复
- 求助-基因的突变文库相关问题
已经有7人回复
- 目的片段与载体连接后无法检测出
已经有7人回复
- 感受态细胞提取的质粒酶解后为什么带型不一样？
已经有12人回复
- 酶切后未纯化连接出现的问题
已经有18人回复
- 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？
已经有13人回复
- pUC18和pBR322质粒的装载量分别是多少？
已经有8人回复
- DNA的连接反应
已经有5人回复
- 载体连接pcr片段一直连不上
已经有17人回复
- 质粒构建时连接的片段总是反方向，求助！
已经有7人回复
- 质粒是否需要酶切后再电泳？
已经有9人回复
- 求助啊！转质粒出现问题了！
已经有13人回复
- 请教关于宝公司pMD18T连接问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】连接总是连不上，如何解决
已经有10人回复
- 【求助/交流】大片段连接转化成功与否问题
已经有11人回复
2楼2013-04-26 10:52:54
senix
木虫 (小有名气)
- 应助: 32 (小学生)
- 金币: 5122.1
- 散金: 200
- 红花: 1
- 帖子: 66
- 在线: 278.8小时
- 虫号: 330877
- 注册: 2007-03-24
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
3楼2013-04-26 19:06:13
wangxin320
银虫 (小有名气)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 1015.5
- 红花: 4
- 帖子: 67
- 在线: 46.4小时
- 虫号: 2438073
- 注册: 2013-04-26
- 专业: 生物化学
4楼2013-05-03 15:09:21
意孤城_
金虫 (正式写手)
- 应助: 32 (小学生)
- 金币: 1223.8
- 散金: 506
- 红花: 9
- 帖子: 533
- 在线: 55.6小时
- 虫号: 1600188
- 注册: 2012-02-05
- 性别: GG
- 专业: 生物材料
5楼2013-05-03 16:38:30
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 3232.6
- 散金: 1266
- 红花: 43
- 帖子: 2256
- 在线: 276.6小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
6楼2013-05-03 22:02:37
lly198784
木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2357.5
- 散金: 30
- 帖子: 411
- 在线: 151.2小时
- 虫号: 716835
- 注册: 2009-03-07
- 性别: MM
- 专业: 生物化工与食品化工
7楼2013-06-24 11:02:54
lly198784
木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2357.5
- 散金: 30
- 帖子: 411
- 在线: 151.2小时
- 虫号: 716835
- 注册: 2009-03-07
- 性别: MM
- 专业: 生物化工与食品化工
8楼2013-06-24 11:04:33
lly198784
木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2357.5
- 散金: 30
- 帖子: 411
- 在线: 151.2小时
- 虫号: 716835
- 注册: 2009-03-07
- 性别: MM
- 专业: 生物化工与食品化工
9楼2013-06-24 11:04:52
lly198784
木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2357.5
- 散金: 30
- 帖子: 411
- 在线: 151.2小时
- 虫号: 716835
- 注册: 2009-03-07
- 性别: MM
- 专业: 生物化工与食品化工
10楼2013-06-24 11:05:16
