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lly198784木虫 (正式写手)
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质粒与片段的连接
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| 我最近在构建一个重组质粒,因为酶切位点只剩下XbaI可以选择,所以只能XbaI单连,用此酶单酶切空质粒是切出一条很亮的条带的,然后去磷酸化后与酶切后的片段按照摩尔比1:3,1:5,1:10进行了10微升和16微升的连接体系用快速连接酶solution I连接了5个小时,但是做了好几次,结果都是无任何克隆长出,质粒大小是5809bp, 片段是5399 bp,是不是因为两个都太长且比较相近所以很难连接吗?我之前用同样的XbaI单连另外一个载体是成功的,但是那个重组质粒总长7000多bp。请懂的大侠们支招啊?做了一个月了,感觉很失败啊,以前我构建都是一次性或者两次就成功的。 |
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senix
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