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lly198784木虫 (正式写手)
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质粒与片段的连接
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| 我最近在构建一个重组质粒，因为酶切位点只剩下XbaI可以选择，所以只能XbaI单连，用此酶单酶切空质粒是切出一条很亮的条带的，然后去磷酸化后与酶切后的片段按照摩尔比1：3，1:5,1:10进行了10微升和16微升的连接体系用快速连接酶solution I连接了5个小时，但是做了好几次，结果都是无任何克隆长出，质粒大小是5809bp， 片段是5399 bp，是不是因为两个都太长且比较相近所以很难连接吗？我之前用同样的XbaI单连另外一个载体是成功的，但是那个重组质粒总长7000多bp。请懂的大侠们支招啊？做了一个月了，感觉很失败啊，以前我构建都是一次性或者两次就成功的。 |
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