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wy135033405木虫 (小有名气)
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无模板pcr合成短片段 一直失败
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在下需要合成的片段为107bp，为了节省开支，设计了6条短引物，以数字大致表示如下（一条链的5' 端为起点，互补链也从该方向计数，加' 表示）： p1: 1-30 p2：15'-45' p3: 31-60 p4: 46'-75' p5: 60-90 p6: 76'-107' 如图 6条引物去除重叠部分可以拼凑成目的片段，目前使用多种酶、体系、反应条件均无法p出目的片段，在不重新设计引物的条件下，请大家提供些意见。本帖只为求助，如果确实通过您的方案做出结果，另赠100金币，绝不食言。  图示 |
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wy135033405
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2楼2012-07-16 17:10:17
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| 可以考虑先加入三段进行PCR15个循环，然后再加入后三段引物进行PCR30循环，我之前试过这样做，希望可以给予你帮助。 |
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3楼2012-07-16 19:06:30
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5楼2012-07-16 20:42:59
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P1，P6 浓度10P,作为PCR体系的两端引物，分别取1ul P2，P3，P4，P5 混在一起，混合物中每条的浓度1p, 取1ul,作为模板 退火温度55C, 30个循环 |
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6楼2012-07-16 20:55:51
wy135033405
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