24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2769  |  回复: 44
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wy135033405

木虫 (小有名气)

[求助] 无模板pcr合成短片段 一直失败

在下需要合成的片段为107bp,为了节省开支,设计了6条短引物,以数字大致表示如下(一条链的5' 端为起点,互补链也从该方向计数,加' 表示):

p1: 1-30  p2:15'-45'  p3: 31-60 p4: 46'-75'  p5: 60-90 p6: 76'-107'

如图

6条引物去除重叠部分可以拼凑成目的片段,目前使用多种酶、体系、反应条件均无法p出目的片段,在不重新设计引物的条件下,请大家提供些意见。本帖只为求助,如果确实通过您的方案做出结果,另赠100金币,绝不食言。

图示
回复此楼

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihegang2000

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这么短的片段不需要PCR,两两退火,磷酸化之后连接起来就可以了
10楼2012-07-16 23:10:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihegang2000

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wy135033405: 金币+10, ★★★很有帮助, 又一种思路,受益良多。 2012-07-17 16:26:18
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-18 13:46:12
引用回帖:
11楼: Originally posted by wy135033405 at 2012-07-17 08:08:08
感谢指导,能否提供具体一点的方案?...

先将p2、p3、p4、p5使用PNK(磷酸激酶)磷酸化并灭活,再将p1与p2、p3与p4、p5与p6分别退火,最后将三者用T4 DNA连接酶连接起来。
22楼2012-07-17 15:16:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihegang2000

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
22楼: Originally posted by lihegang2000 at 2012-07-17 15:16:52
先将p2、p3、p4、p5使用PNK(磷酸激酶)磷酸化并灭活,再将p1与p2、p3与p4、p5与p6分别退火,最后将三者用T4 DNA连接酶连接起来。...

写错了,PNK是多核苷酸激酶
23楼2012-07-17 15:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wy135033405 的主题更新
信息提示
请填处理意见