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547star

木虫 (著名写手)

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片段小,需要延伸的长度短,基本上延伸5秒就可以了,7个循环也就几分钟,应该很快的.没有复杂结构的基因合成600bp内都很容易得到。关键在于排除突变，循环次数不要多,一定要高保真酶，有mutS结合突变序列来排除就更好了。

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wy135033405

为什么

21楼2012-07-17 12:54:54

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lihegang2000

铁杆木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wy135033405: 金币+10, ★★★很有帮助, 又一种思路，受益良多。 2012-07-17 16:26:18
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-18 13:46:12

引用回帖:

11楼: Originally posted by wy135033405 at 2012-07-17 08:08:08
感谢指导，能否提供具体一点的方案？...

先将p2、p3、p4、p5使用PNK（磷酸激酶）磷酸化并灭活，再将p1与p2、p3与p4、p5与p6分别退火，最后将三者用T4 DNA连接酶连接起来。

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22楼2012-07-17 15:16:52

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lihegang2000

铁杆木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

22楼: Originally posted by lihegang2000 at 2012-07-17 15:16:52
先将p2、p3、p4、p5使用PNK（磷酸激酶）磷酸化并灭活，再将p1与p2、p3与p4、p5与p6分别退火，最后将三者用T4 DNA连接酶连接起来。...

写错了，PNK是多核苷酸激酶

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23楼2012-07-17 15:21:11

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wy135033405

木虫 (小有名气)

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引用回帖:

21楼: Originally posted by 547star at 2012-07-17 12:54:54
片段小,需要延伸的长度短,基本上延伸5秒就可以了,7个循环也就几分钟,应该很快的.没有复杂结构的基因合成600bp内都很容易得到。关键在于排除突变，循环次数不要多,一定要高保真酶，有mutS结合突变序列来排除就更好了 ...

感谢~

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24楼2012-07-17 16:25:21

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