应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 无模板pcr合成短片段 一直失败
55/1返回列表
查看: 3536  |  回复: 44
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wy135033405

木虫 (小有名气)

[求助] 无模板pcr合成短片段 一直失败

在下需要合成的片段为107bp，为了节省开支，设计了6条短引物，以数字大致表示如下（一条链的5' 端为起点，互补链也从该方向计数，加' 表示）：

p1: 1-30  p2：15'-45'  p3: 31-60 p4: 46'-75'  p5: 60-90 p6: 76'-107'

如图

6条引物去除重叠部分可以拼凑成目的片段，目前使用多种酶、体系、反应条件均无法p出目的片段，在不重新设计引物的条件下，请大家提供些意见。本帖只为求助，如果确实通过您的方案做出结果，另赠100金币，绝不食言。

图示
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

sunny_andy 小马步步高

» 猜你喜欢
1楼 2012-07-16 15:29:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunny_andy

金虫 (小有名气)
送红花一朵
我现在也在做短片段融合 我连基本体系都不清楚  只做过普通PCR 想请教具体的PCR体系和您做短片段融合的经验  我有差不多20个短片段 老师还催得特别紧没有时间给我摸索浪费  可以传授下经验吗  特别着急！
赞一下 回复此楼
44楼2014-08-11 19:22:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 45 个回答

wcg129

禁虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-16 20:17:58
wy135033405: 金币+5, ★有帮助 2012-07-17 11:34:45
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wy135033405
2楼2012-07-16 17:10:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wy135033405: 金币+5, ★有帮助 2012-07-17 11:34:33
可以考虑先加入三段进行PCR15个循环，然后再加入后三段引物进行PCR30循环，我之前试过这样做，希望可以给予你帮助。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wy135033405
3楼2012-07-16 19:06:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wy135033405

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wcg129 at 2012-07-16 17:10:17
107bp
这样做省不了多少钱，直接合成也才几百块钱
个人觉得合成还经济些，主要是合成时间要10+天，慢

真的要这么做可以试试
但是看你的设计不是很理解，你P2/P4/P6是和P1/P3/P5序列在同一条链上还是互补链？
...

唉，直接合成的话论文就少了一部分内容嘛……但是实际上我已经做了超过十天了，而且各种酶和marker之类的估计也抵过省下那点钱了……

是互补链，能不能详细讲一下？
赞一下 回复此楼
4楼2012-07-16 20:41:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 45 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭