应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急求:PCR 产物连接转化 涂板后就是不长 到底是怎么回事啊
61/1返回列表
查看: 2954  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wer0313

铁虫 (初入文坛)

[求助] 急求:PCR 产物连接转化 涂板后就是不长 到底是怎么回事啊

用PCR 产物做了三四次连接转化 一直都不长 用的是零背景载体 我让连接成功的人也给我做了次也没有做出来 后来用试剂盒中的control insert DNA作对照 还是没有长 感受态是好的 别人都用过 自己都不知道是哪儿出问题了 急求大神们帮小弟分析一下哇
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-17 11:32:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wer0313(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-17 14:46:29
最近我也在做，也有出现这些现象。我觉得楼主可以试试1、测测PCR产物核酸浓度，然后进行产物纯化；2、测测质粒酶切回收浓度，这是关键，如果浓度过低在连接时可多加点；3、用空质粒作对照看看能否长出来；4、做转化每步都很重要，得多做几次才可以。祝福楼主早点转化成功
赞一下(1人) 回复此楼
要么读书，要么旅行，身体和灵魂，必须有一个在路上
2楼2013-05-17 11:58:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

applewxy

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
wer0313(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-17 14:46:39
本帖内容被屏蔽
3楼2013-05-17 13:30:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wer0313

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sunnyboylg at 2013-05-17 11:58:36
最近我也在做，也有出现这些现象。我觉得楼主可以试试1、测测PCR产物核酸浓度，然后进行产物纯化；2、测测质粒酶切回收浓度，这是关键，如果浓度过低在连接时可多加点；3、用空质粒作对照看看能否长出来；4、做转化 ...

空质粒转化是不是也要按照5µ质粒+50µ 来做？
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-17 13:56:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

空质粒转化就是用未连接目的片段的质粒与感受态结合转化，其他条件和重组子转化一样
赞一下 回复此楼
要么读书，要么旅行，身体和灵魂，必须有一个在路上
5楼2013-05-17 14:02:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

傻瓜笨蛋4

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by wer0313 at 2013-05-17 11:32:40
用PCR 产物做了三四次连接转化 一直都不长 用的是零背景载体 我让连接成功的人也给我做了次也没有做出来 后来用试剂盒中的control insert DNA作对照 还是没有长 感受态是好的 别人都用过 自己都不知道是哪儿出问题了 ...

最近我也遇到这种情况，不知道你是怎么解决的，求指点

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-04-11 10:38:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wer0313 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 283求调剂 +9 小楼。 2026-03-12 13/650 2026-03-16 15:08 by 加号+
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-10 11/550 2026-03-14 12:18 by 邱gl
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 0805，333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
[考研] 一志愿：武汉理工，材料工程，英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭