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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急求:PCR 产物连接转化 涂板后就是不长 到底是怎么回事啊
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wer0313

铁虫 (初入文坛)

[求助] 急求:PCR 产物连接转化 涂板后就是不长 到底是怎么回事啊

用PCR 产物做了三四次连接转化 一直都不长 用的是零背景载体 我让连接成功的人也给我做了次也没有做出来 后来用试剂盒中的control insert DNA作对照 还是没有长 感受态是好的 别人都用过 自己都不知道是哪儿出问题了 急求大神们帮小弟分析一下哇
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1楼 2013-05-17 11:32:40
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wer0313(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-17 14:46:29
最近我也在做，也有出现这些现象。我觉得楼主可以试试1、测测PCR产物核酸浓度，然后进行产物纯化；2、测测质粒酶切回收浓度，这是关键，如果浓度过低在连接时可多加点；3、用空质粒作对照看看能否长出来；4、做转化每步都很重要，得多做几次才可以。祝福楼主早点转化成功
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要么读书，要么旅行，身体和灵魂，必须有一个在路上
2楼2013-05-17 11:58:36
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applewxy

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
wer0313(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-17 14:46:39
本帖内容被屏蔽
3楼2013-05-17 13:30:33
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wer0313

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sunnyboylg at 2013-05-17 11:58:36
最近我也在做，也有出现这些现象。我觉得楼主可以试试1、测测PCR产物核酸浓度，然后进行产物纯化；2、测测质粒酶切回收浓度，这是关键，如果浓度过低在连接时可多加点；3、用空质粒作对照看看能否长出来；4、做转化 ...

空质粒转化是不是也要按照5µ质粒+50µ 来做？
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4楼2013-05-17 13:56:45
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

空质粒转化就是用未连接目的片段的质粒与感受态结合转化，其他条件和重组子转化一样
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要么读书，要么旅行，身体和灵魂，必须有一个在路上
5楼2013-05-17 14:02:44
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傻瓜笨蛋4

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by wer0313 at 2013-05-17 11:32:40
用PCR 产物做了三四次连接转化 一直都不长 用的是零背景载体 我让连接成功的人也给我做了次也没有做出来 后来用试剂盒中的control insert DNA作对照 还是没有长 感受态是好的 别人都用过 自己都不知道是哪儿出问题了 ...

最近我也遇到这种情况，不知道你是怎么解决的，求指点

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6楼2017-04-11 10:38:49
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